Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава
|
Скачать 1.7 Mb.
|
ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ Под иммунитетом (от лат. immunitas — освобождение, избавление от чего-либо) в биологии и медицине понимают комплекс реакций организма, направленных на сохранение его структурной и функциональной целостности при воздействии на организм генетически чужеродных веществ, как поступающих извне, так и образующихся внутри организма. Различают несколько основных видов иммунитета: -Наследственный иммунитет (врождённый, видовой) обусловлен выработкой в процессе филогенеза генетически закрепленной невосприимчивости вида к данному антигену или микроорганизму. -Приобретенный иммунитет специфичен и не передаётся по наследству. Он формируется естественно и создается искусственно. Естественный приобретенный иммунитет появляется после перенесённого инфекционного заболевания (оспа, корь и др.). Искусственный приобретенный иммунитет возникает при вакцинации. Иммунитет бывает активный и пассивный. Активный иммунитет вырабатывается организмом в результате воздействия антигена на иммунную систему (например, при вакцинации). Пассивный иммунитет обусловлен антителами, передаваемыми от иммунной матери ребенку при рождении или путем введения иммунных сывороток, а также при пересадке иммунных клеток. Активный иммунитет может быть гуморальным (обусловлен антителами), клеточным (обусловлен им-мунокомпетентными клетками) и клеточно-гумораль-ным (обусловлен и антителами, и иммунокомпетентными клетками). Например, антитоксический иммунитет к ботулизму и столбняку является гуморальным, так как он обусловлен антителами, циркулирующими в крови; иммунитет к лепре или туберкулезу — клеточный, а к оспе — клеточно-гуморальный. Различают также иммунитет стерильный, сохраняющийся в отсутствие микроорганизма, и нестерильный, который существует только при наличии возбудителя в организме. Классическим примером нестерильного иммунитета является иммунитет при туберкулезе. Отдельно выделяют так называемый местный иммунитет, который защищает отдельные участки организма, например, слизистые оболочки от возбудителей инфекционных болезней. Он формируется при участии секреторного иммуноглобулина А и характеризуется более активным фагоцитозом. Антигены — это любые генетически чужеродные для данного организма вещества (обычно биополимеры), которые, попав во внутреннюю среду организма или образуясь в организме, вызывают ответную специфическую иммунологическую реакцию: синтез антител, появление сенсибилизированных лимфоцитов или возникновение толерантности к этому веществу, гиперчувствительности замедленного или немедленного типов, иммунологической памяти. Антигены обладают специфичностью, которая связана с определённой химической группой в составе молекулы, называемой детерминантой, или эпитопом. Детерминанты антигена — это те его части, которые распознаются антителами и иммунокомпетентными клетками. Различают полноценные и неполноценные (гаптены) антигены. Антигены, вызывающие полноценный иммунный ответ, имеющие 2 и более детерминанты, называются полноценными. Это органические вещества микробного, растительного и животного происхождения. Гаптенами могут быть химические вещества с малой молекулярной массой или более сложные химические вещества, не обладающие свойствами полноценного антигена: некоторые бактериальные полисахариды, полипептид туберкулёзной палочки (РРД), ДНК, РНК, липиды, пептиды. Гаптены из-за небольшой молекулярной массы не фиксируются иммунокомпетентыми клетками макроорганизма и не могут вызвать ответную иммунологическую реакцию. Полугаптены — неорганические радикалы (йод, бром, нитрогруппа, азот и др.), присоединившиеся к белковой молекуле, могут менять иммунологическую специфичность белка. Антителообразование. В ответ на введение антигена иммунная система вырабатывает антитела — белки, способные специфически соединяться с антигеном, вызвавшим их образование и, таким образом, участвовать в иммунологических реакциях. Относятся антитела к у-глобулинам, т. е. наименее подвижной в электрическом поле фракции белков сыворотки крови. В организме у-глобулины вырабатываются особыми клетками — плаз-моцитами. В соответствии с Международной классификации у-глобулины, несущие функции антител, получили название иммуноглобулинов и обозначаются символом lg. Следовательно, антитела — это иммуноглобулины, вырабатываемые в ответ на введение антигена и способные специфически взаимодействовать с этим же антигеном. Функции антител. Первичная функция антител состоит во взаимодействии их активных центров с комплементарными им детерминантами антигенов. Вторичная функция антител состоит из их способности: - связывать антиген с целью его нейтрализации и элиминации из организма; - участвовать в распознавании «чужого» антигена; - обеспечивать кооперацию иммунокомпетентных клеток (макрофагов, Т- и В- лимфоцитов); - участвовать в различных формах иммунного ответа (фагоцитоз, киллерная функция, иммунологическая толерантность, иммунологическая память, гиперчувствительность немедленного типа, гиперчувствительность замедленного типа). Белки иммуноглобулинов по химическому составу относятся к гликопротеидам, так как состоят из протеина и сахаров; построены из 18 аминокислот. Различают 5 классов иммуноглобулинов: IqM, IgG, IgA, IgE,IgD. Иммуноглобулины М, G, А имеют подклассы. Например, IgG имеет четыре подкласса (IgGl, IgG2, IgG3, IgG4). Иммунологической памятью называют способность организма при повторной встрече с одним и тем же антигеном реагировать более активным и более быстрым формированием иммунитета, т.е. реагировать по типу вторичного иммунного ответа. Иммунологическая толерантность явление противоположное иммунологической памяти. В этом случае в ответ на повторное введение антигена организм вместо энергичной выработки иммунитета проявляет ареактив-ность, не отвечает иммунной реакцией, т. е. толерантен антигену. УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №17 Т е м а: Серологический метод лабораторной диагностики. Серологические реакции: реакция агглютинации, реакция непрямой гемагглютинации, реакция преципитации. Диагностикумы и диагностические сыворотки Учебная цель: Освоение серологического метода лабораторной диагностики, а также комплементнезависи-мых серологических реакций. Необходимый исходный уровень знаний: Физиологические механизмы иммунитета. Практические знания и умения, которые должен получить студент на занятии:
Вопросы, рассматриваемые на занятии:
Самостоятельная работа студентов:
3. Постановка и учет реакции термокольцепреципитации с целью сероиндикации сибирской язвы. 4. Указать правильные ответы в тестовых заданиях. Практическая работа студентов: 1. Просмотр и зарисовка демонстрационных препаратов: а) реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РПГА); б) реакция торможения гемагглютинации (РТГА); в) реакция преципитации в геле. Контрольные вопросы:
9. Как ставится реакция непрямой гемагглютинации? Каковы ее компоненты и механизм?
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ Укажите правильные ответы: 1. Титр антител — это: а) количество антигена, связавшееся в эквивалентном соотношении с антителом б) наибольшая концентрация антител в пробирке, при которой происходит реакция в) наименьшая концентрация антител в пробирке, при которой происходит реакция г) наибольшее разведение сыворотки, при котором происходит реакция д) наименьшее разведение сыворотки, при котором происходит реакция 2. Диагностикумы — это стандартные препараты, которые: а) не обладают патогенностью б) не обладают антигенностью в) являются эндотоксинами г) получают из чистых культур микроорганизмов определенных видов или их антигенов д) сохраняют антигенные свойства 3. Что такое реакция агглютинации? а) это растворение антигенов под действием антител и комплемента б) это нейтрализация антигенов антителами в) это склеивание корпускулярных антигенов под действием антител г) это осаждение комплекса антиген — антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. 4. Что содержат диагностические сыворотки? а) известные антигены б) известные антитела в) эритроциты г) микроорганизмы 5. Что содержат диагностикумы? а) известные антитела б) известные антигены в) комплемент г) иммуноглобулины 6. Какие компоненты участвуют в реакции непрямой гемагглютинации? а) антитела, антигены, комплемент б) антитела, антигены, физиологический раствор в) антигены, физиологический раствор г) антигены, эритроциты, антитела, физиологический раствор 7. Какие компоненты участвуют в реакции преципитации? а) корпускулярные антигены, антитела, физиологический раствор б) растворимые антигены, антитела, физиологический раствор в) антигены, антитела, комплемент г) антигены, антитела, эритроциты, физиологический раствор 8. Какие компоненты участвуют в реакции торможения гемагглютинации? а) антигены, антитела, физиологический раствор б) антигены, антитела, комплемент в) корпускулярные антигены, антитела, физиологический раствор г) вирусы, эритроциты, антитела д) бактерии, эритроциты, антитела 9. Дополнительным компонентом (кроме антигенов и антител), участвующим в реакции агглютинации является: а) комплемент сыворотки морской свинки б) изотонический раствор NaCl в) эритроциты г) гемолитическая система 10. Визуальный результат реакции агглютинации: а) гемолиз эритроцитов барана б) задержка гемолиза эритроцитов барана в) просветление мутной среды реакции и образование крупнодисперсного (зернистого) осадка г) помутнение прозрачной среды реакции и образование мелкодисперсной взвеси (флоккулята) или кольца преципитации. ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ I. Реакция агглютинации на предметном стекле Нанести на предметное стекло на достаточном расстоянии друг от друга три капли: физиологического раствора, брюшнотифозной агглютинирующей сыворотки (№ 1) и дизентерийной агглютинирующей сыворотки (№ 2). Исследуемую культуру внести в каплю физиологического раствора и тщательно растереть в ней до появления выраженного помутнения. Бактериальной петлей подготовленную взвесь перенести в сыворотку № 1 и тщательно перемешать. Далее бактериологическую петлю необходимо простерилизовать прокаливанием. Затем взять бактериальной петлей материал из взвеси культуры в капле физиологического раствора и внести ее в каплю сыворотки № 2. Стекло слегка и осторожно покачивать для тщательного перемешивания. Учет результатов реакции производят спустя 1-2 минуты: в капле физиологического раствора сохраняется равномерное помутнение, тогда как в капле одной из сывороток отмечается агглютинация. Признаками агглютинации являются: выпадение зерен агглютината и просветление жидкости. В случае обнаружения в контрольной капле с физиологическим раствором спонтанной агглютинации результаты реакции не подлежат дальнейшему учету, а сама реакция требует повторной постановки. II. Развернутая реакция агглютинации Развернутая реакция агглютинации поставлена с целью определения титра антител в сыворотке крови больного. Исследуемая сыворотка разводится физиологическим раствором в 50 раз, и полученное таким образом разведение (1:50) считается исходным. Далее исходное разведение сыворотки последовательно двукратно разводится физиологическим раствором. Для этого (см. схему постановки): а) во все агглютинационные пробирки, кроме № 6, вносятся по 1,0 мл физиологического раствора; б) в пробирку № 1 и № 6 вносится по 1,0 мл сыворотки в исходном разведении 1:50, и, таким образом, сыворотка в пробирке № 1 разводится еще вдвое, то есть в 100 раз; в) 1,0 мл сыворотки из пробирки № 1 переносится в пробирку № 2 к имеющимся в ней 1,0 мл физиологического раствора, вследствие чего сыворотка разводится еще вдвое, то есть в 200 раз, и так далее, вплоть до пробирки № 5, где разведение достигает 1:1600; г) очевидно, что в пробирках № 1 -№ 4 содержится по 1,0 мл сыворотки, тогда как в пробирке № 5 содержится 2,0 мл ее — избыточные 1,0 мл удаляются, и, таким образом, объемы в опытных пробирках № 1 — № 5 уравниваются. В пробирке № 6 осуществляется контроль сыворотки. Далее в каждую пробирку, за исключением пробирки № 6, вносят по 2 капли ДИАГНОСТИКУМА — обработанной формалином взвеси в физиологическом растворе клеток культуры Salmonella typhi, в каждом миллилитре которой содержится 2 миллиарда бактериальных тел. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в термостат при t 37°С на 2 часа. После выдержки в термостате штатив с реакцией выдерживают при комнатной температуре или «на холоду» (+3° +5°С) в течение 18 часов.
Учет результатов производят через сутки в следующей последовательности: в первую очередь оценивают состояние контрольных пробирок (№6 и №7), во вторую очередь
III. Реакция кольцепреципитации Реакция преципитации используется чаще всего для определения наличия в материале растворимых антигенов. В контрольную преципитационную пробирку, приблизительно до половины ее объема вносится нормальная сыворотка. В опытную пробирку вносится то же количество преципитирующей сыворотки. Далее в каждую пробирку вносится небольшое количество исследуемого материала — например, экстракта из шкуры животного (овцы), погибшей предположительно от сибирской язвы. Исследуемый материал следует вносить путем осторожного наслаивания на внутреннюю стенку преципитационной пробирки, удерживаемой в руке на высоте 30-35 см от поверхности рабочего стола под углом 45° к горизонтали. В опытной пробирке на границе сыворотки и исследуемого материала наблюдается образование преципитата: белесоватого «диска», необратимо разрушающегося при встряхивании пробирки. В контрольной пробирке образования преципитата не наблюдается. IV. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РИТА) РПГА основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами (эритроцитарный диагностикум), взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов в осадок на дно пробирки (лунки) в виде «раскрытого зонтика». Исследуемую сыворотку больного разводят в 10 раз и прогревают при 65°С 20 минут на водяной бане для удаления неспецифических гемагглютининов, затем готовят ряд ее разведений от 1:100 до 1:3200 и разливают в лунки по 0,5 мл. В каждую лунку добавляют по 0,5 мл диагностикума. В каждый ряд лунок добавляется соответствующий эритроцитарный диагностикум: к шигеллам Зонне, Флекснера, Ньюкастла и поливалентный сальмонеллезный. Одновременно ставят контроли диагностикумов и контроль исследуемой сыворотки. Результат реакции учитывают после инкубации в термостате в течение 2 часов при 37°С или при комнатной температуре в течение 1824 часов. Реакция считается положительной при условии расположения эритроцитов в виде «зонтика» по всей поверхности дна лунки и оценивается как «+». Схема постановки
УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬ СКАЯ РАБОТА №18 Т е м а: Комплементзависимые серологические реакции. Современные серологические и несерологические методы диагностики. Сдача модуля по теме «инфекция и иммунитет» Учебная цель: Освоение комплементзависимых серологических реакций, а также современных серологических и несерологических методов диагностики. Необходимый исходный уровень знаний: Физиологические механизмы иммунитета. Серологические реакции, их составные компоненты. Практические знания и умения, которые должен получить студент на занятии:
Вопросы, рассматриваемые на занятии: 1. Реакции иммунного лизиса, компоненты, механизм, разновидности реакции иммунного лизиса 2. Реакция связывания комплемента, компоненты, механизм, цель использования
Самостоятельная работа студентов: 1. Постановка и учет реакции связывания комплемента с целью серодиагностики сифилиса 2. Указать правильные ответы в тестовых заданиях. Практическая работа студентов: 1. Просмотр и зарисовка демонстраций: а) прямой метод реакции иммунофлюоресценции, поставленный с целью сероиндикации хламидий в отделяемом из уретры больного хламидиозом; б) твердофазный иммуноферментный метод, поставленный с целью серодиагностики гепатита В. Контрольные вопросы:
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ Укажите правильные ответы: 1. Разновидностями реакции иммунного лизиса являются: а) гемагглютинация б) гемолиз в) кольцепреципитация г) бактериолиз д) цитолиз 2. Какие еще компоненты (кроме антигенов и антител) участвуют в реакции связывания комплемента? а) бактерии б) комплемент в) эритроциты барана г) гемолитическая сыворотка д) физиологический раствор 3. При постановке иммуноферментного анализа антитела или антигены метят: а) пероксидазой б) флюорохромом в) радиоизотопом г) комплементом 4. Наиболее современными серологическими реакциями являются: а) реакция агглютинации б) реакция связывания комплемента в) иммуноферментный анализ г) полимеразная цепная реакция д) реакция иммунофлюоресценции 5. Выявить наличие характерного для определенного микроорганизма участка нуклеиновой кислоты в исследуемом материале и многократно размножить его позволяет: а) иммуноферментный анализ б) полимеразная цепная реакция в) радиоиммунный анализ г) реакция иммунофлюоресценции ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ: Принципиальная схема постановки реакции связывания комплемента
Инкубация при t 370C — 40 минут. Учет результатов Гемолиз + Гемолиз + | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка: 