Скачать 314.62 Kb.
|
ШАЛАЕВ ИВАН МИХАЙЛОВИЧ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ДЕРМАТОФИТОЗОВ СОБАК И КОШЕК, ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОГРИБКОВОЙ ТЕРАПИИ В УСЛОВИЯХ КРАЙНЕГО СЕВЕРА 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология; 16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Новосибирск - 2008 Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РоссельхозакадемииНаучный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Глотова Татьяна Ивановна Научный консультант: доктор ветеринарных наук, член-корреспондент Россельхозакадемии Лайшев Константин Анверович Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Самородова Инна Моисеевна; кандидат ветеринарных наук, доцент Грязин Валерий Николаевич Ведущая организация: Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательскийветеринарный институт Защита состоится «___» _________ 2008 г. в «___» часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01. при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ. С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Россельхозакадемии Автореферат разослан «___» ________ 2008 г. У ![]() диссертационного совета Г.М. Стеблева 1. Общая характеристика работы Актуальность проблемы. В последние годы одной из ведущих проблем для многих ветеринарных специалистов являются поражения кожи и волосяного покрова у собак и кошек, обусловленные инфекционной патологией, в частности дерматофитозами. Для их лечения и профилактики применяют различные противогрибковые препараты, что приводит к снижению заболеваемости. Однако полностью искоренить трихофитию и микроспорию мелких домашних животных до сегодняшнего времени не удается. В последние годы были разработаны и внедрены в ветеринарную практику вакцины: Поливак-ТМ, Вакдерм, Микродерм и другие, которые в настоящее время используются в России в качестве основного средства профилактики и лечения дерматофитозов собак и кошек (Е.И. Горячкина, 1999; А.В. Цыганко, 2003). Массовое их использование с лечебной и профилактической целью в некоторых случаях (ослабленные животные) бывает неэффективным, приводит к развитию миконосительства, особенно, у кошек, которые в течение длительного времени служат источником инфекции для восприимчивых животных (В.А. Авдиенко и др., 2003; М.И. Райц и др., 2003). Также существует ряд факторов, снижающих эффективность применения вакцин: плохие условия содержания и кормления животных, высокая их концентрация, наличие вирусных, бактериальных и эктопаразитарных инфекций. Дерматофитозы также являются актуальной проблемой медицины (Н.П. Головина, 1999; А.М. Литвинов, 2000). Увеличение зоонозной микроспории у человека (В.М. Рукавишникова, 1997; О.Н. Позднякова, 2002; R.J. Hay, W. Robles et al., 2001) свидетельствует о недостаточной эффективности мероприятий против дерматофитозов мелких домашних животных. В этой связи очевидным является то, что в современных условиях крупных городов при реализации противоэпизоотических мероприятий не всегда учитывают все клинико-эпизоотические и этиологические особенности дерматофитозов, с учетом которых можно предложить оптимальные стратегию и тактику лечения больных животных. В последние годы расширился арсенал фунгистатических и фунгицидных противогрибковых препаратов, которые широко используются в медицине (Е.Н. Волкова и др., 1999; В.М. Рукавишникова, 2001), некоторые из них находят применение и в ветеринарии (Т.Б. Тугунова, 2004). К сожалению, большинство из них оказывает побочное действие на организм животного (раздражение слизистой желудочно-кишечного тракта, токсическое действие на печень), а также требует длительного применения. Рост числа кожных заболеваний грибной этиологии у домашних животных и прослеживающаяся в последние годы тенденция увеличения зоонозной микроспории у людей (В.М. Рукавишникова, 2001), обусловленной M. canis, вызывают необходимость повышения эффективности противогрибковой терапии. В настоящее время для повышения эффективности лечения многих хронических вирусных и бактериальных инфекций у собак и кошек применяют разнообразные биологически активные добавки животного и растительного происхождения (E.G.Gootzi, W.A. Scott, 1981). Широко известны препараты из неокостеневших рогов северных оленей, содержащие макро- и микроэлементы, аминокислоты, липиды, гормоны и ферменты (В.Г. Шелепов и др., 1999; Г.И. Тюпкина и др., 2004). Биологически активные добавки, в состав которых входят жирные кислоты, витамины и микроэлементы, широко применяются в медицине при проведении терапии дерматитов различной этиологии. Известно также, что они улучшают состояние кожных покровов и шерсти у животных (Н.В. Данилевская и др., 2003). Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение распространения дерматофитозов собак и кошек и повышение эффективности противогрибковой терапии в условиях Крайнего Севера. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи: 1. Изучить этиологическую структуру, особенности распространения и клинического проявления дерматофитозов мелких домашних животных в условиях Крайнего Севера на примере Норильского муниципального округа. 2. Выяснить влияние ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей на гематологические показатели и естественную резистентность у собак и кошек. 3. Установить возможность применения ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей для повышения эффективности противогрибковой терапии дерматофитозов собак и кошек. Научная новизна. Результатами микологических исследований доказано широкое распространение дерматофитозов у собак и кошек в условиях Крайнего Севера с максимальным количеством больных животных в августе-сентябре после массового возвращения населения со своими питомцами из летних отпусков. Определено, что основным возбудителем дерматофитозов собак и кошек в Норильском муниципальном образовании является M. сanis, в некоторых случаях - Tr. mentagrophytes и M. gypseum. Установлено стимулирующее влияние ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей на показатели естественной резистентности у лабораторных животных, собак и кошек. Использование ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей в схеме терапии дерматофитозов собак и кошек позволяет повысить ее эффективность, снизить дозу противогрибкового препарата, сократить продолжительность лечения животных. Практическая значимость работы. Результаты исследований открывают возможность повышения эффективности противогрибковой терапии за счет применения ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей и учета клинико-эпизоотологических особенностей проявления дерматофитозов у животных. Разработаны методические рекомендации «Лечение и профилактика дерматомикозов собак и кошек», рассмотренные и утвержденные Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии (протокол № 2 от 29.06.07) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (протокол № 2 от 29.06.07). Апробация работы. Материалы исследований доложены на научно-практической ветеринарной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2007), на первом съезде ветеринарных фармакологов России (Воронеж, 2007), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии и сельскохозяйственной биотехнологии» (Павлодар, 2007). Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 – в журналах, рекомендованных ВАК. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 6 рисунками и 22 таблицами. Список литературы представлен 229 источниками, в том числе 103 зарубежными. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Распространение дерматофитозов собак и кошек в условиях Крайнего Севера, особенности их клинического проявления и этиологическая структура. 2. Влияние ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей на гематологические показатели и естественную резистентность у собак и кошек. 3. Применение ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей для повышения эффективности противогрибковой терапии дерматофитозов собак и кошек. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований Распространение, особенности клинического проявления дерматофитозов мелких домашних животных изучали путем клинического обследования животных, поступающих в ветеринарные клиники и находящихся в условиях частных питомников по выращиванию собак и кошек г. Норильска, в течение 2001-2006 гг. Микологические исследования проводили в лаборатории биотехнологии ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии. Для выделения возбудителей дерматофитозов использовали пробы биоматериала от животных с клиническими признаками поражений кожи и волосяного покрова, отобранные в условиях ветеринарных клиник и частных питомников. Биоматериал отбирали с периферии очагов поражения, не подвергавшихся ранее медикаментозному лечению. Корочки с остатками волос, волосы выдергивали пинцетом и помещали в бумажные пакетики, на которых указывали возраст, вид, породу и степень поражения животного, а также дату взятия материала. Особое внимание уделяли правилам отбора биоматериала от животных-миконосителей, не имеющих характерных клинических признаков поражения шерсти и кожного покрова. Материал от таких животных отбирали не менее чем с 12-15 участков кожи в области головы, шеи, туловища, бедер, лап, хвоста (по 2-3 пробы с каждого участка). Посев каждой пробы проводили на 15-20 пробирок с глюкозным агаром Сабуро, которые культивировали в термостате при 280С в течение 30 суток. Люминесцентную диагностику осуществляли при помощи переносной установки с ртутно-кварцевой лампой ПРК-2 со светофильтром УСФФЗ (фильтр Вуда). Для микроскопических исследований пробы биологического материала помещали в стерильную чашку Петри, которую ставили на темный фон. С помощью препаровальной иглы и глазного скальпеля отбирали и отделяли корневые части волос, покрытые белым налетом, и кожные чешуйки. После этого несколько отрезков волос и чешуек переносили на предметное стекло в каплю 10-15% NaОН или КОН, слегка подогревали над пламенем горелки до появления ободка вокруг капли и добавляли каплю 50% водного раствора глицерина. Препарат покрывали стеклом. Микроскопию препаратов проводили с объективами х10, х20, х40 с целью обнаружения грибных элементов. В работе использовали синтетические питательные среды: агар Сабуро, глюкозный агар Сабуро, мясо-пептонный глицериновый агар, мясо-петоннный агар.При определении вида возбудителя описывали культурально-морфологические признаки: размер колоний, их структуру и цвет, строение растущего края, пигментацию обратной стороны колонии и питательной среды. Проводили микроскопическое исследование, отмечая строение и ширину мицелия, форму и размеры микро- и макроконидий, хламидо- и артроспор. Идентификацию культур грибов проводили в соответствии с «Определителем патогенных и условно-патогенных грибов» (Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди, Москва, 2001). Для определения кератинолитических свойств дерматофитов проводили тест на перфорацию волос. Исследования по получению ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей и анализу его химического состава проводили в отделе ветеринарии и биотехнологии ГНУ НИИСХ Крайнего Севера, биохимические исследования - в лаборатории биохимии ГНУ СибНИПТиЖ СО Россельхозакадемии. Для получения ультрадисперсного порошка законсервированные панты предварительно очищали от кожи, измельчали последовательно: на костедробилке, мельнице, истирателе с виброприводом УХЛ-4. Данная обработка позволила получить частицы размером менее 60 мкм. Количественное определение аминокислот в полученном ультрадисперсном порошке (УДП) проводили с помощью автоматического аминокислотного анализатора KLA-3B (Hitachi, Japan), содержание витаминов определяли на многофункциональном автоматическом анализаторе близкого инфракрасного спектра «Infropid-61», а гормонов - на иммунохемилюминесцентном анализаторе ELECSIS 1010. Для определения микро- и макроэлементов на атомно-эмиссионном спектрометре «IRIS» использовали 0,3 нормальные азотнокислые растворы образцов. Исследование токсического действия УДП проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических средств» (Е.В. Арзамасцев и соавт., 1997) на неполовозрелых крысах в возрасте одного месяца десяти дней. Всего в опыте использовано по 10 самцов и самок белых лабораторных крыс весом 58-64 г (по 5 животных в группе). Гематологические исследования проводили по общепринятым методикам. Для определения показателей естественной резистентности использовали методику в модификации С.И. Плященко, В.Т. Сидорова (1979). Общий белок в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом, определение белковых фракций проводили нефелометрическим методом. В качестве противогрибкового препарата использовали Ламизил (тербинафина гидрохлорид) производства «Сандоз». Изучение возможности использования ультрадисперсного порошка для повышения эффективности противогрибковой терапии проводили на кошках в очаге естественной микроспории, его лечебную эффективность в комплексе с тербинафином определяли на 108 кошках и 36 собаках, естественно инфицированных дерматофитами. Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки и определения различий средних значений с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р < 0,05. Для обработки полученных данных использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office 7.0». Автор выражает глубокую благодарность за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертации заведующей отделом ветеринарии и биотехнологии Г.И. Тюпкиной, члену-корреспонденту Россельхозакадемии В.Г. Шелепову, ведущему научному сотруднику отдела ветеринарии и биотехнологии А.А. Кайзеру. 2.2. Результаты исследований 2.2.1. Распространение дерматофитозов среди собак и кошек в Норильском муниципальном образовании Суровые природно-климатические условия Крайнего Севера, недостаток инсоляции и физических нагрузок снижают уровень естественной резистентности, оказывают влияние на особенности распространения и клинического проявления патологий инфекционной и неинфекционной этиологии у домашних животных. Изучение динамики заболеваемости дерматофитозами мелких домашних животных проводили по результатам клинического обследования собак и кошек с признаками поражения кожи и волосяного покрова, данных микроскопии, люминесцентного и микологического анализов проб биоматериала, отобранных от них. Всего обследовано 39 285 собак и 49 983 кошек, поступивших в ветеринарные клиники Норильского муниципального образования за период 2001-2006 гг. Результаты изучения распространения дерматофитозов среди собак и кошек представлены в таблице 1. Таблица 1 - Динамика заболеваемости собак и кошек, больных дерматофитозами в Норильском муниципальном образовании
Анализ результатов микологических исследований проб биоматериала, отобранных от животных с признаками поражений кожи и волосяного покрова, выявил за период с 2001 по 2006 гг. 377 (21,6%) собак, больных дерматофитозами. Заболеваемость собак в период 2001-2004 гг. находилась практически на одном уровне (23,6-24,6%), а с 2005 г. (19,4%) отмечается тенденция к ее снижению. В 2006 г. выявлено наименьшее количество собак, больных дерматофитозами (13,2%). Изучение заболеваемости микроспорией кошек показало, что наблюдается ее снижение, хотя абсолютное число ежегодно регистрируемых кошек, пораженных дерматофитозами, остается высоким. В 2001 г. отмечен максимум заболеваемости (140) кошек микроспорией, в 2002 г. зарегистрировано 125 случаев, после чего наблюдалось некоторое ее снижение (в 2003 – 106; 2004 -84; 2005 -62). В 2006 году выявлено минимальное количество кошек, больных дерматофитозами – 48, что составило 17,4% от количества животных с признаками поражений кожи и волосяного покрова. Анализ результатов микологических исследований проб биоматериала, отобранных от животных, выявил 377 (21,6%) собак и 565 (28,9%) кошек, больных дерматофитозами. Заболеваемость животных в период 2001-2004 гг. находилась практически на одном уровне, а с 2005 г. отмечается тенденция к ее снижению, обусловленная проведением эффективной противогрибковой терапии животных в клиниках города. Восприимчивость к заболеванию дерматофитозами, в частности к микроспории, у собак и кошек неодинакова и зависит от индивидуальных и породных особенностей, а также от эксплуатации и содержания (А.В. Горбатов, 1984). Проведенные исследования показали, что наиболее часто дерматофитозами поражаются беспородные собаки – 36,7%. Второе место по заболеваемости занимают американские кокер-спаниели (11,2%), пудели и французские болонки (9,5%), русский спаниель (8,0%) и другие. Установлено, что наиболее часто болеют беспородные кошки (17,3%), невская маскарадная (15,0%), сиамская (14,5%), экзотическая короткошерстная (13,5%) и другие породы. З ![]() аболеваемость дерматофитозами собак и кошек в различные сезоны года неодинакова (рис. 1). Рисунок 1 - Динамика заболеваемости собак и кошек в Норильском муниципальном образовании за период 2001-2006 гг., % По нашим данным, наибольшее количество больных животных регистрируется в августе-октябре, с максимумом в сентябре, в то время как в других регионах России - в июле-августе (Н.П. Головина, Ч.П. Колодиев, 1999), в сентябре-ноябре с максимумом в ноябре (Т.Б. Тугунова, 2004). На уровень заболеваемости собак и кошек оказывают влияние климатогеографические факторы, особенности содержания животных в условиях Норильского муниципального образования, связанные с массовым вывозом большего числа домашних животных владельцами на материк в летние месяцы года. В условиях Крайнего Севера максимальное количество животных, больных дерматофитозами, регистрируют по истечении 1-1,5 месяцев после массового возвращения населения со своими питомцами из летних отпусков (август-сентябрь). В результате проведенных исследований за анализируемый период времени у собак и кошек были выявлены все описанные в литературе клинические формы проявления дерматофитозов, описанные в литературе. Классическую и скрытую формы регистрировали у собак равномерно в течение всего года. Рассеянно-диффузную — чаще в весенне-осенний период, преимущественно у немецких овчарок. Эрозионную — в весенне-летний у пуделей, немецких овчарок и колли. Атипичная форма наиболее характерна для шарпеев. У кошек преобладала бессимптомная и классическая формы заболевания, в редких случаях — рассеянно-диффузная и эрозионная. При рассеянно-диффузной у одного животного насчитывали от 2…3 до 15 и более очагов поражений. У кошек преобладала бессимптомная и классическая формы заболевания, в редких случаях - рассеянно-диффузная и эрозионная, в большинстве случаев осложненные ярко выраженными аллергическими реакциями. Зарегистрированы две вспышки микроспории у кошек в двух частных питомниках, сопровождающиеся заболеванием их владельцев. Проведенный анализ возрастных особенностей при заболевании дерматофитозами мелких домашних животных выявил, что как собаки, так и кошки переболевают в основном в возрасте до 6 месяцев. В результате проведенных микологических исследований 1745 проб биоматериала от собак и 1956 от кошек с признаками поражения кожи и волосяного покрова выделено 377(21,6%) и 565 (28,9%) изолятов грибов, соответственно. После изучения культурально-морфологических свойств были идентифицированы следующие виды грибов: M.canis (926), M.gypseum (4) и Tr.mentagrophytes (12). Кроме того, изолированы культуры плесневых (Aspergillus, Penicillium, Mucor) и дрожжеподобных (Malassezia, Candida) грибов. При проведении теста на перфорацию волос все изолированные из проб биоматериала культуры грибов M. canis, M. gypseum и Tr. mentagrophytes проявили ярко выраженную кератинолитическую активность, свидетельствующую об их патогенности. 2.2.2. Влияние ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей на гематологические и показатели естественной резистентности В настоящее время при производстве кормов для собак и кошек применяются разнообразные биологически активные добавки животного и растительного происхождения. К сожалению, многие из этих препаратов не соответствуют цели своего предназначения или вызывают аллергические реакции у животных. В последние годы начали привлекать внимание исследователей неокостеневшие рога (панты) северных оленей (В.Г. Шелепов и др., 1990; Г.И. Тюпкина и др., 2004). Обычно биологически активные препараты из пантов получают путем механического размола или водноспиртовой экстракции. Учитывая то, что кошкам и собакам задавать данные препараты в такой форме довольно сложно, использовали их в виде ультрадисперсного порошка. Для его получения, предварительно очищенные от кожи законсервированные панты методом истирания измельчали последовательно: на костедробилке, мельнице и истирателе с виброприводом УХЛ-4. Данная обработка позволила получить частицы с размером менее 60 мкм. Общий анализ состава УДП показал, что в нем содержится большое количество неорганических и органических соединений (табл. 2). Таблица 2 – Общий химический состав ультрадисперсного порошка из пантов северных оленей
Известно, что аминокислоты способствуют нормализации функций клеточных мембран, активизации энергетических и обменных процессов. Установили, что УДП содержит большое количество аминокислот и жирных кислот ![]() Таблица 3 – Биохимический состав ультрадисперсного порошка из пантов |
Показатель | Содержание в 1 кг УДП |
Насыщенные жирные кислоты, г | 51,20±0,47 |
Ненасыщенные жирные кислоты, г | 63,50±0,32 |
Сумма аминокислот, г | 18,43±0,82 |
Группа | ИПХИ |
Опытная, самцы | 7,11 |
Контрольная, самцы | 7,94 |
Опытная, самки | 7,65 |
Контрольная, самки | 7,73 |
Наименование показателя | Время исследований | Группы животных | |||
Собаки | Кошки | ||||
опыт | контроль | опыт | контроль | ||
Бактерицидная активность, % | фон через 10 дней | 45,31,31 65,31,32 | 49,52,87 43,6 1,56 | 40,21,24 70,21,57 | 45,81,87 49,42,12 |
Фагоцитарная активность, % | фон через 10 дней | 38,52,01 78,82,13 | 33,91,27 38,12,25 | 28,62,12 47,5, 2,88 | 31,31,98 30,21,87 |
Комплементарная активность, % | фон через 10 дней | 7,21,06 16,51,67 | 7,41,37 7,51,21 | 8,62,24 17,82,19 | 8,31,97 8,51,29 |
Группа животных (n = 6) | Доза препарата (мг/кг) | Длительность заболевания, сутки | СИВС, баллы | ИЛД, % |
Контрольная 1 тербинафин | 20 | 24,03,2 | 25,0 | 65,0 |
Контрольная 2 тербинафин | 30 | 21,02,86 | 22,0 | 69,0 |
Опытная 1 тербинафин+УДП | 20 | 20,03,2* | 21,0 | 71,0* |
Опытная 2 тербинафин+УДП | 30 | 19,02,86* | 20,0 | 72,0* |
Наименование показателя | Время исследований | Бактерицидная активность | Фагоцитарная активность | Комплементарная активность |
Опытная группа 1 Тербинафин и УДП | Фон Через 20 суток | 40,21,2 60,21,6 | 42,62,1 49,5, 2,8 | 8,62,2 13,82,19 |
Контроль | Фон Через 20 суток | 48,81,8 49,42,1 | 40,31,9 43,21,8 | 8,31,9 8,21,5 |
Критерии эффективности лечения | Срок наблюдения, суток | ||
21 | 28 | 35 | |
Количество животных без проявления клинических признаков, голов | 102 | 106 | 108 |
% к общему количеству животных | 94,4 | 100 | 100 |
Количество животных с отрицательными результатами микологических исследований, голов | 95 | 102 | 108 |
% к общему количеству животных | 87,96 | 94,4 | 100 |
Критерии эффективности лечения | Срок наблюдения, суток | ||
21 | 28 | 35 | |
Количество животных без проявления клинических признаков, голов | 33 | 35 | 36 |
% к общему количеству животных | 91,67 | 97,2 | 100 |
Количество животных с отрицательными результатами микологических исследований, голов | 26 | 31 | 36 |
% к общему количеству животных | 72,2 | 86,11 | 100 |