На правах рукописи
ИНДЮКОВ Андрей Леонидович
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЦИДИСЕПТА-О ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПОРОСЯТ И ТЕЛЯТ
16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Воронеж – 2008
Работа выполнена в отделе фармакологии и токсикологии ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии
Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор
Беляев Василий Иванович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Аргунов Муаед Нурдинович
кандидат ветеринарных наук, доцент
Кочетов Иван Алексеевич
Ведущая организация: Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.
Защита состоится 19 февраля 2009 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ВНИВИПФиТ) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ
Автореферат разослан 25 декабря 2008 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета Ермакова Т.И.
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1.1. Актуальность темы. Увеличение производства говядины и свинины непосредственно связано с сохранностью молодняка, особенно в условиях промышленной технологии ведения отрасли. Однако концентрация молодняка в крупных промышленных комплексах сопряжена с высокой заболеваемостью животных желудочно-кишечными болезнями бактериальной этиологии. При этом наибольший удельный вес среди желудочно-кишечных заболеваний поросят и телят приходится на долю колибактериоза, сальмонеллеза и дизентерии.
По данным департамента ветеринарии РФ основными заболеваниями сельскохозяйственных животных в 2007 году были желудочно-кишечные болезни, доля которых по всем заболеваниям у крупного рогатого скота составляла 35,6 %, у свиней – 48,3 %, а среди телят 52,4 %, поросят 53,2 % (Белковой И.И. и др., 2007).
При этом многочисленными исследованиями по изучению этиологии желудочно-кишечных болезней молодняка установлено, что в хозяйствах в возникновении этих заболеваний как правило, принимают участие ассоциации возбудителей, среди которых превалируют эшерихии и сальмонеллы (Шахов А.Г., 2008).
В связи с этим в борьбе с подобными заболеваниями в комплексе ветеринарных мероприятий необходимо использование новых антибактериальных средств, обладающих широким спектром антимикробного действия в отношении основных возбудителей – энтеробактерий.
Для подавления патогенной микрофлоры предложен широкий спектр препаратов, включающий в себя антибиотики, нитрофураны и сульфаниламиды. Однако длительное применение антибактериальных средств, в частности антибиотиков, приводит к появлению и широкому распространению резистентных штаммов микроорганизмов, к нарушению микробных экологических систем в пищеварительном тракте и возникновению дисбактериозов. В связи с этим особого внимания заслуживает разработка новых, не являющихся антибиотиками, препаратов для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.
К таким препаратам в частности относится цидисепт-о на основе циминаля. По данным литературы (Машковский М.Д. и др. 1994г.) пара-нитро-α-хлоркоричный альдегид (циминаль) применяется в медицине в составе препаратов цимезоль и цидипол для лечения и профилактики гнойных осложнений при повреждении мягких тканей и для профилактики и лечения болезней мочеполовых путей вызванных трепонемами, гонококками, трихомонадами. Циминаль подавляет грамположительную и грамотрицательную микрофлору, способствует эпителизации и заживлению ран, оказывает прямое действие на цитоплазматическую мембрану микроорганизмов, адсорбируясь на ее фосфолипидных компонентах, что способствует нарушению ее проницаемости и выходу в среду водорастворимых компонентов цитоплазмы.
В ветеринарии препараты на основе циминаля используются для лечения ран (цидисепт-гель), при заболеваниях системы органов дыхания (цидисепт-аэро).
Исходя из указанных свойств циминаля разработан новый, не содержащий антибиотиков, антибактериальный препарат цидисепт-о. Однако данных по токсикометрическим параметрам, фармакологическим свойствам и эффективности цидисепта-о при колибактериозе в литературе нет.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлось исследование фармако-токсикологических свойств препарата на основе пара-нитро-α-хлоркоричного альдегида – цидисепта-о и эффективности его при профилактики и лечении колибактериоза поросят и телят.
Для достижения указанной цели на разрешение были поставлены задачи:
- определить фармако-токсикологические свойства цидисепта-о (параметры и класс токсичности, хроническую токсичность препарата, раздражающие, аллергенные, эмбриотоксические и тератогенные свойства, распределение в органах и тканях, сроки выведения остаточных количеств цидисепта-о из организма поросят);
- изучить влияние препарата в различных дозах на клинико-биохимические показатели лабораторных животных, поросят и телят;
- оценить структурное состояние органов и тканей животных при применении цидисепта-о в различных дозах;
- определить профилактическую и лечебную эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят и телят.
1.3. Научная новизна работы. Впервые дана токсикометрическая характеристика нового, неантибиотического, антибактериального препарата цидисепт-о, изучены его фармакологические параметры и свойства, влияние на клинико-биохимические показатели животных. Установлены пути и сроки выведения препарата из организма животных, доказана его лечебная и профилактическая эффективность при колибактериозе телят и поросят, дана экономическая оценка применения цидисепта-о в ветеринарии.
1.4. Практическая значимость работы. В практику ветеринарной медицины предложен новый антибактериальный препарат цидисепт-о для профилактики и лечения колибактериоза поросят и телят, кроме того дана фармако-токсикологическая оценка цидисепта-о, показано влияние его на гомеостаз лабораторных и сельскохозяйственных животных. Результаты исследований включены в нормативно – техническую документацию на цидисепт-о.
1.5. Апробация работы. Результаты экспериментов автора были представлены на первом съезде ветеринарных фармакологов (Воронеж 2007), научно-практической конференции фармакологов РФ посвященной 85-летию М.И. Рабиновича (Троицк, 2007), научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц» (Екатеринбург, 2008), Международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел (Москва, 2008), Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка» (Воронеж 2008).
1.6. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них три в журналах рекомендованных ВАК РФ. В публикациях отражено основное содержание диссертации.
1.7. Основные положения, выносимые на защиту:
- токсикологические и фармакологические свойства цидисепта-о;
- биохимические, гематологические и гистоморфологические показатели животных при применении цидисепта-о в различных дозах;
- лечебно-профилактическая эффективность цидисепта-о.
1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста, иллюстрирована 54 таблицами, 11 рисунками и 2 графиками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы состоит из 160 источников, из которых 52 иностранных.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнена в 2005-2008 гг. во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии фармакологии и терапии в соответствии с планом НИР ВНИВИПФиТ по заданию 08.04.01 (№ гос. регистрации 01.2000.11.17018). Научно-производственные исследования проведены на базе хозяйств Воронежской области (ОАО «Юбилейный» Хохольского района и ООО «Вероника» Калачеевского района).
Отдельные исследования по определению параметров токсичности изучаемого препарата и по его влиянию на животных проведены при участии сотрудников ВНИВИПФиТ: доктора биологических наук Востроиловой Г.А., профессора Сулейманова С.М., кандидата ветеринарных наук Михайлова Е.В., кандидата биологических наук Шушлебина В.И. Определение антимикробной активности цидисепта-о проводилось под руководством член-корреспондента РАСХН Шахова А.Г. В проведении научно-хозяйственных экспериментов принимали участие кандидат биологических наук Алехин Ю.Н., научный сотрудник Куркин Е.В. и другие. Указанным лицам автор выражает искреннюю признательность и благодарность за оказанную помощь.
Для решения поставленных задач были организованы и проведены лабораторные и научно-производственные опыты на лабораторных и сельскохозяйственных животных.
Объектами наших исследований являлись беспородные белые мыши и крысы, морские свинки породы «Альбинос», кролики породы «Белый великан», поросята крупной белой породы, телята симментальской породы, а так же кровь, плазма, сыворотка крови, гистологические препараты.
Для оценки антимикробной активности, фармако-токсикологических свойств и лечебно-профилактической эффективности цидисепта-о провели ряд опытов и исследований, схема и объем которых приведены в таблице 1.
Таблица 1
Схема и объем экспериментальных и научных исследований
Задачи исследования
|
Вид животных
|
Количество животных
|
Показатели
|
1
|
2
|
3
|
4
|
Антимикробная активность
|
Культуры микроорганизмов
E.coli 078
E.coli 08
E.coli 0142 (п)
E.coli A 20
|
500000 клеток в 1 мл среды
|
Минимальная подавляющая концентрация.
|
Острая токсичность
|
Белые мыши
Белые крысы
|
60
60
|
Определение ЛД50 при введении per os.
|
Хроническая токсичность
|
Белые крысы
|
60
|
Динамика массы тела, коэффициенты массы внутренних органов, морфологические, биохимические показатели крови, гистоморфологич. показатели, клиника.
|
Субхроническая токсичность
|
Поросята
|
12
|
Клиническое состояние, прирост массы тела, морфологические, биохимические показатели.
|
Раздражающее действие
|
Кролики
|
12
|
Клиническое состояние (поведение, рефлексы, температура тела, пульс, дыхание). Влияние на конъюнктиву глаз, на кожу (гиперемия, отек, эритема).
|
Аллергизирующие свойства
|
Морские свинки
Белые крысы
|
11
8
|
Сенсибилизация, показатель РДТК.
|
Эмбриотоксическое и тератогенное действие
|
Белые крысы
|
30
|
Количество желтых тел, мест имплантации, эмбрионов (живых и мертвых), средний вес крысенка, его длина, масса плаценты, аномалии развития.
|
Фармакокинетика препарата
|
Поросята
Телята
|
22
8
|
Содержание цидисепта-о в крови, печени, почках, мышцах, моче.
|
Лечебно-профилактическая эффективность
|
Поросята
Телята
|
102
107
|
Клиническое состояние, биохимические показатели крови, данные бактериологии.
|
Формирование групп экспериментальных животных и организация их нормированного кормления, учет их роста, взятие проб крови осуществлялось на основании действующих государственных стандартов, а также методических положений и установок, разработанных ВИЖ и РАСХН.
Антимикробную активность цидисепта-о изучали методом серийных разведений в отношении референтных и полевых штаммов микроорганизмов, основных возбудителей желудочно-кишечных болезней у поросят и телят типированных по морфологическим, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) цидисепта-о определяли методом разведений в мясопептонном бульоне (МПБ).
Острую токсичность цидисепта-о изучали в опытах на белых мышах и белых крысах при внутрижелудочном введении препарата. Среднюю дозу эффекта определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990).
Хроническую токсичность цидисепта-о изучали на белых крысах в опыте при длительном скармливании препарата в течение 21 дня в дозах ориентировочно терапевтической и в 3 и 5 раза выше терапевтической.
Изучение субхронической токсичности цидисепта-о проводили на поросятах при пероральном введении препарата в течение 14 дней в терапевтической дозе (0,5 мл/кг). Общетоксическое действие препарата оценивали по клиническому состоянию животных, по динамике массы тела поросят, гематологическим и биохимическим показателям крови и мочи.
Изучение раздражающего действия цидисепта-о проводили на белых кроликах и морских свинках методом накожных аппликаций при одно - и многократном нанесении и втирании чистого (нативного) препарата, а также путем постановки конъюнктивальной пробы.
Исследование специфических видов токсичности препарата определяли путем изучения аллергизирующих свойств, эмбриотоксичности и тератогенности цидисепта-о.
Аллергенность цидисепта-о изучали путем постановки кожных реакций, конъюнктивальной пробы у сенсибилизированных препаратом морских свинок, а также путем постановки реакции дегрануляции тучных клеток (РДТК), используя белых крыс в соответствии с Методическими рекомендациями, разработанными в НИИ медицины труда АМН РФ по единой схеме постановке токсикоаллергических экспериментов.
Эмбриотоксическое и тератогенное действие цидисепта-о изучали по методике Шицковой А.П. (1977). Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность определяли по формулам, предложенным Малашенко A.M., Егоровым И.К. (1977).
Для оценки общего действия цидисепта-о на организм лабораторных животных, поросят и телят, лечебной и профилактической эффективности препарата при колибактериозе проводили оценку клинического состояния животных, морфологических и биохимических показателей крови.
В крови определяли: количество лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ. Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка, липидов и билирубина наборами фирмы «Vital Diagnostics», концентрацию мочевины, фосфора, холестерина, глюкозы, креатинина, кальция, активность аспартат- и аланинаминотрасфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы и γ-глутамилтрансферазы - на биохимическом анализаторе «Hitachi-902». Определение содержания средних молекул, сорбционную способность эритроцитов проводили по Ю.Н. Алехину и др. (2000-2007).
Исследование мочи (удельный вес, pH, нитриты, белок, глюкоза, кетоны, уробилиноген, билирубин, кровь) проводили, используя специальные тест - полоски (DEKA PHAN ASCO).
Определение остаточного содержания цидисепта-о в органах, тканях и биологических жидкостях проводили спектрофотометрическим методом, измеряя оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 313 нм.
Диагноз на заболевание поросят и телят желудочно-кишечным заболеванием бактериальной этиологии (колибактериоз) устанавливали на основании анализа данных эпизоотологической ситуации в хозяйстве, клинического состояния животных, данных патологоанатомического вскрытия и лабораторных бактериологических исследований.
Экономическую эффективность цидисепта-о при профилактики и лечении колибактериоза поросят и телят рассчитывали в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ РФ (1997 г.).
Опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования (И.Т. Фролов, 1965).
Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием прикладной программы «Statistica 5.0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стъюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Антимикробная активность цидисепта-о.
Изучение антимикробной активности цидисепта-о в опытах in vitro показало, что препарат обладает высокой активностью в отношении большинства тестируемых музейных (референтных) и полевых (эпизоотических) культур микроорганизмов. Минимальная подавляющая рост концентрация цидисепта-о в отношении культур E.coli 08, E.coli A 20 составила 7,8 мкг/мл, в отношении культур E.coli 0142 (п), E.coli 078 – 15,6 мкг/мл.
3.2. Острая токсичность цидисепта-о.
Определение параметров токсичности цидисепта-о в остром опыте, при однократном пероральном введении, выполнили на двух видах лабораторных животных: белых крысах и белых мышах. При токсикометрической оценке цидисепта-о испытывали следующие дозы: 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0 и 30,0 мл/кг. Среднелетальную дозу - LD50 препарата определить не удалось, так как при введении внутрь цидисепта-о в максимально возможных объемах (0,6 мл - белым мышам и 6,0 мл - белым крысам) в дозе 30,0 мл/кг массы тела не отмечалось гибели животных. Исходя из полученных данных считаем, что препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76).
3.3. Хроническая токсичность цидисепта-о.
Изучение хронической токсичности цидисепта-о проводили на белых крысах при многократном введении препарата 21 день подряд с кормом в терапевтической (0,5 мл/кг), трёх- (1,5 мл/кг) и пятикратной терапевтической (2,5 мл/кг) дозах. На протяжении всего опыта гибели крыс в контрольной и опытной группах зарегистрировано не было. Препарат не вызывал изменений в реакции на внешние раздражители, а также нарушений в двигательной активности крыс. Животные, получавшие препарат лучше поедали корма, отличаясь более хорошим аппетитом. Цидисепт-о способствовал приросту массы тела белых крыс, величина которого зависела от дозы препарата. При введении крысам цидисепта-о с кормом в дозах 0,5 и 1,5 мл/кг массы тела наблюдался ростостимулирующий эффект. Однако при дозировке 2,5 мл/кг происходило снижение привесов массы тела у крыс как на 7-й, так и на 14 и 21-й день применения препарата (рис. 1).
 Рис. 1. Динамика привесов крыс, получавших цидисепт-о в дозе 0,5; 1,5 и 2,5 мл/кг массы тела и контрольной группы
Коэффициенты массы внутренних органов крыс, получавших препарат в течение 21 дня в дозах 0,5;1,5 и 2,5 мл/кг массы тела существенно не отличались от контроля.
При исследовании крови крыс, получавших цидисепт-о в терапевтической (0,5 мл/кг) и трехкратной терапевтической (1,5 мл/кг) дозах, не отмечено по сравнению с контролем достоверных изменений биохимических показателей на 7,14 и 21-й день применения препарата. Среднее значение исследованных показателей у опытных животных не выходило за границы физиологической нормы для данного вида животных. При увеличении дозы цидисепта-о до 2,5 мл/кг и лишь на 21-й день применения препарата отмечалось более напряженное функционирование выделительной системы и печени (табл.1).
Таблица 1
Морфологические и биохимические показатели крови белых крыс при многократном пероральном введении цидисепта-о на 21-й день применения препарата
Показатели
|
1 гр.
(контроль)
|
2 гр. (0,5 мл/кг)
|
3 гр. (1,5 мл/кг)
|
4 гр. (2,5 мл/кг)
|
СОЭ, мм/ч
|
1,5±0,3
|
1,3±0,3
|
1,5±0,2
|
1,4±0,0
|
Лейкоциты,109/л
|
11,6±1,1
|
11,8±0,6
|
10,9±0,7
|
11,5±0,8
|
Гемоглобин, г/л
|
120,2±8,5
|
121,4±2,1
|
127,6±5,9
|
123,9±7,7
|
Фосфор, мМ/л
|
2,15±0,1
|
2,2±0,1
|
2,2±0,2
|
2,1±0,2
|
Общий белок, г/л
|
68,5±4,2
|
69,3±1,3
|
77,2±2,8
|
80,1±1,9*
|
Альбумины, %
|
41,6±1,6
|
40,6±1,3
|
34,8±3,6
|
30,1±1,1*
|
α - глобулины, %
|
17,1±1,6
|
17,2±1,1
|
15,3±1,1
|
14,0±1,6
|
β –глобулины, %
|
10,5±0,9
|
10,7±0,9
|
12,5±0,9
|
13,3±1,3*
|
γ - глобулины, %
|
30,8±2,7
|
31,5±2,1
|
37,4±3,7
|
42,6±3,1*
|
Мочевина, мМ/л
|
5,1±0,1
|
5,2±0,2
|
5,5±0,6
|
5,8±0,3*
|
Креатинин, мкМ/л
|
78,0±5,2
|
83,5±5,3
|
93,1±7,1
|
98,6±5,1*
|
Глюкоза, мМ/л
|
8,3±1,0
|
9,3±1,8
|
8,9±0,6
|
7,6±0,1
|
Холестерин, мМ/л
|
2,7±0,3
|
2,8±0,1
|
3,1±0,3
|
3,6±0,5
|
АсАТ, мМ/л.час
|
1,6±0,1
|
1,7±0,7
|
1,8±0,1
|
2,1±0,3*
|
АлАТ, мМ/л.час
|
1,3±0,1
|
1,2±0,4
|
1,4±0,1
|
1,5±0,1
|
ЩФ, мМ/л.час
|
5,6±0,1
|
5,2±0,3
|
5,1±0,6
|
8,5±1,1*
|
* - Р < 0,05 по сравнению с контролем
Наблюдалось повышение по сравнению с контролем содержания в сыворотке крови мочевины в среднем на 12,7 %, креатинина – на 26,4 %. У крыс данной группы произошло увеличение уровня общего белка на 16,9 %, β-глобулинов на 26,7 % и γ-глобулинов на 38,3 %, а концентрация альбуминов снижалась на 27,6 %, α-глобулинов на 18,1 %.
Активность щелочной фосфотазы повысилась по отношению к контрольной группе крыс на 51,6 %, АсАТ и АлАТ – на 31,1 и 12,9 %.
3.4. Гистологические изменения в органах и тканях экспериментальных животных при хроническом применении цидисепта-о.
При изучении структурной организации паренхиматозных органов у белых крыс, получавших цидисепт-о в течение 21 дня ежедневно в дозах 0,5; 1,5 и 2,5 мл/кг было выяснено, что препарат в дозах 0,5 и 1,5 мл/кг не влияет негативно на структурную организацию печени, почек, легких, сердца, селезенки, слизистой оболочки желудка, семенников, надпочечников и тимуса белых крыс как на 7-й день, так и на 14 и 21-й дни исследования.
Наблюдаемые, при дозе препарата в 5 раз превышающую терапевтическую (2,5 мл/кг) и лишь на 21 день применения цидисепта-о, дистрофические процессы в печени, почках и слизистой оболочке желудка носили обратимый характер (рис. 2,3,4).
Рис. 2. Десквамация эпителия слизистой оболочки желудка на 21-й день при дозе цидисепта-о 2,5 мл/кг
Рис. 3. Дистрофические процессы в почечных канальцах на 21-й день при дозе цидисепта-о 2,5 мл/кг
Рис. 4. Дистрофические процессы в паренхиме печени на 21-й день при дозе цидисепта-о 2,5 мл/кг
3.5. Раздражающее действие цидисепта-о.
Изучение раздражающего действия цидисепта-о проведено на кроликах и морских свинках в соответствии с общепринятыми в токсикологии методами. При нанесении нативного препарата на конъюнктиву глаза кроликам не было отмечено гиперемии, слезотечения, выделений и отека век. Клиническое состояние организма кроликов оставалось в пределах нормы, т.е. не выявлялись изменения в температуре тела, частоте пульса и количестве дыхательных движений.
При однократном нанесении цидисепта-о на кожные покровы, препарат не вызывал раздражающего действия.
Накожные аппликации цидисепта-о в течение 20 дней подряд в объеме 0,1 мл на 4 см2 кожного покрова, не вызывали раздражающего действия - повреждений кожи в виде эритемы или ее отеков.
3.6. Аллергизирующие свойства цидисепта-о.
Изучение аллергенных свойств препарата включало в себя несколько методов аллергодиагностики in vivo и in vitro.
При исследовании аллергизирующего действия цидисепта-о на морских свинках после перорального введения препарата ежедневно в течение 30 дней с последующими кожными тестами на 10, 15 и 30 дни от начала введения цидисепта-о, гиперчувствительности к препарату не возникало. Гиперемии, отека и десквамации кожи также отмечено не было.
При постановке конъюнктивальной пробы морским свинкам, предварительно сенсибилизированных цидисептом-о, не было отмечено гиперчуствительности животных к препарату, как через 15 мин (быстрая реакция), так и через 24-48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) после нанесения препарата на конъюнктиву глаз.
При постановке РДТК не выявлено аллергической реакции сенсибилизированных животных на исследуемый препарат. РДТК – отрицательная.
3.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие цидисепта-о.
Эмбриотоксическое и тератогенное действие цидисепта-о изучали на самках белых крыс. Животным второй и третьей группы на пятый день беременности (период имплантации) перорально задавали цидисепт-о в дозе 0,5 и 2,5 мл/кг массы тела соответственно. Животным четвертой и пятой группы препарат задавали на 10 день беременности (период органогенеза) в дозе 0,5 и 2,5 мл/кг массы тела, первая группа – контрольная.
Для выявления повреждающего действия препарата на плод часть самок убивали на 20 день беременности. Другую половину самок оставляли до наступления естественных родов. Наблюдения за полученным молодняком осуществляли в течение 30 дней.
Таблица 2
Эмбриотоксическое и тератогенное действие цидисепта-о
Группа
Показатели
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
Количество живых эмбрионов на одну самку
|
9,3±0,3
|
9,7±0,3
|
9,7±1,2
|
10,3±0,3
|
9,3±0,7
|
Количество мертвых эмбрионов на одну самку
|
0,7±0,3
|
0,3±0,3
|
0,7±0,3
|
0,3±0,3
|
0,7±0,3
|
Количество мест имплантации на одну самку
|
10,0±0,3
|
10,0±0,3
|
10,3±1,5
|
10,7±0,3
|
10,0±1,0
|
Количество желтых тел на одну самку
|
10,7±0,3
|
10,7±0,3
|
10,7±1,2
|
11,3±0,3
|
10,7±1,3
|
Доимплантацион. гибель, %
|
6,1±3,1
|
6,3±3,2
|
3,7±3,7
|
5,8±2,9
|
5,5±2,7
|
Постимплантацион. гибель, %
|
6,3±3,2
|
3,0±3,0
|
5,9±3,0
|
3,0±3,0
|
6,0±3,0
|
Общая эмбриональная смертность, %
|
12,2±2,2
|
9,3±0,3
|
9,6±1,0
|
8,8±0,2
|
11,1±5,6
|
Выживаемость,%
|
90,9±9,1
|
92,8±3,7
|
92,5±4,8
|
93,6±3,2
|
90,6±5,6
|
Средний вес крысенка, мг
|
3651,2±
280,7
|
3749,3±
230,7
|
4075,3±
276,3
|
3741,0±
209,0
|
3825,6±
111,0
|
Средняя длина туловища крысенка, см
|
3,4± 0,1
|
4,3±0,9
|
3,8±0,2
|
3,5±0,1
|
4,4±0,5
|
Уродства, аномалии развития
|
нет
|
нет
|
нет
|
нет
|
нет
|
В опыте по определению эмбриотоксических свойств цидисепта-о на самках белых крыс установлено, что цидисепт-о при пероральном введении его крысам опытных групп на 5-й (период имплантации) и 10-й день беременности (период эмбриогенеза) в дозе 0,5 и 2,5 мл/кг не оказывает токсического действия на развивающиеся зародыши. Напротив его применение оказывает положительное влияние на эмбриогенез и постнатальное развитие крысят. Установлено, что количество живых эмбрионов во 2-й (0,5 мл/кг на 5-й день беременности) и 3-й (2,5 мл/кг на 5-й день) группах было больше на 3,6 % чем в контроле, в 4-й группе (0,5 мл/кг на 10-й день) этот показатель превышал данные контрольной группы на 10,7 %. Доимплантационная гибель у крыс 3, 4 и 5-й опытных групп была ниже, чем в контроле на 39,8 %, 5,4 %, 9,3 % соответственно. Постимплантационная гибель у крыс 2,3,4 и 5-й опытных групп также была ниже по отношению к контролю на 52,6 %, 6,8 %, 52,6 %, 5,2%. Общая эмбриональная смертность у животных опытных групп также была ниже, чем в контроле на 23,7 %, 21,5 %, 28,3 %, и 9 %. Выживаемость крыс 2, 3 и 4-й опытных групп была выше, чем в контроле на 2,1%, 1,8%, 3%.
Тератогенного действия цидисепта-о не установлено. Вес крысят, масса всего помета, кранио-каудальный размер крысят при рождении у животных опытных групп был выше, чем у потомства контрольной группы. Такая же тенденция прослеживалась на 10, 20 и 30 день после рождения при контрольных взвешиваниях и замерах. По другим показателям общего развития у крысят контрольных и подопытных групп не наблюдалось различий. Уши открывались на 2-3 день жизни, с 8 дня крысята начинали обрастать шерстью, между 16 и 19 днем у них открывались глаза.
3.8. Изучение субхронической токсичности цидисепта-о на поросятах.
Определение субхронической токсичности цидисепта-о проводили на поросятах. Первая группа животных была контролем, поросятам второй группы перорально задавали препарат в дозе 0,5 мл/кг массы тела в течение 14 дней.
Установлено, что многократное пероральное введение цидисепта-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии поросят. На протяжении опыта животные опытной и контрольной группы, были энергичными, подвижными, без проявления каких-либо клинических признаков заболевания, имели хороший аппетит, рефлексы сохранены. Нарушений функции пищеварения и мочеотделения не установлено.
При проведении опыта была отмечена тенденция увеличения среднесуточных привесов у поросят, получавших препарат, по отношению к контрольной группе. В частности на 7-й день применения препарата вес поросят опытной группы был на 6,3 % выше веса поросят контрольной группы, на 14-й день разница составила 5,3%.
Достоверных изменений морфологических показателей крови поросят, получавших препарат, не имелось, а незначительные колебания показателей находились в пределах физиологической нормы.
Тоже самое, можно отметить, при анализе биохимических данных крови и мочи поросят, получавших цидисепт-о. Показатели, характеризующие функциональное состояние печени, почек, других органов и систем, белковый, углеводный, липидный, минеральный обмен и активность ферментных систем находились в пределах колебаний физиологической нормы.
3.9. Определение содержания циминаля в органах, тканях и биологических жидкостях животных.
3.9.1. Определение содержания циминаля в крови поросят и телят при однократном его применении.
Для изучения фармакокинетики цидисепта-о в первый опыт было подобрано 8 поросят массой тела 9-10 кг. Во второй опыт - 8 телят массой тела в среднем 40 кг. Поросятам и телятам вводили цидисепт-о индивидуально однократно с питьем в дозе 0,5 мл/кг.
 Рис.5. Содержание циминаля в крови поросят и телят после введения цидисепта-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела.
Через 1, 3, 6, 9, 12 и 24 часа после введения препарата брали кровь для исследования у поросят из хвостовых сосудов, у телят из яремной вены и определяли содержание циминаля.
Установлено, что цидисепт-о быстро всасывается после перорального введения. Через 3 часа после введения препарата содержание циминаля в крови поросят и телят составило 6,05 и 9,99 мкг/мл соответственно. Терапевтическая концентрация циминаля в крови сохранялась до 24 часов.
3.9.2. Определение остаточного содержания циминаля в органах, тканях и биологических жидкостях свиней при длительном его применении.
Определение остаточных количеств циминаля было проведено на 14 клинически здоровых поросятах 2-х месячного возраста, из которых два были контрольными, им препарат не применялся. Поросятам опытной группы в течение 5-ти дней один раз в сутки вводили цидисепт-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела.
Для проведения исследований убивали по 3 опытных животных через 1, 3, 5 и 7 суток после последнего введения цидисепта-о. По одному контрольному животному исследовали через 3 и 7 суток. Содержание циминаля определяли в крови, моче, печени, почках, бедренной мышце.
 Рис.6. Содержание циминаля в органах и биологических жидкостях поросят после 5-ти дневного орального применения цидисепта-о в дозе 0,5 мл/кг
Установлено, что через 1 сутки после последнего введения цидисепта-о препарат определяется во всех исследуемых органах и биологических жидкостях. Наибольшее его количество содержится в печени, почках.
Через 3 суток после последнего введения цидисепта-о остаточные количества препарата также определялись во всех исследуемых материалах. Наибольшая его концентрация содержалась в моче, она повысилась по отношению к первому дню после последнего введения препарата на 47,5 % и составила 4,63±0,17 мкг/мл. Это говорит о том, что препарат на третьи сутки после последнего применения активно начинает выводиться из организма с мочой.
На 5-е сутки после последнего введения препарата циминаль в крови и мышцах не обнаруживался, содержание его в моче составляло 0,06±0,00 мкг/мл, а в печени и почках - 0,01±0,00 мкг/мл.
На 7 сутки после последнего введения препарата циминаль отсутствовал во всех исследуемых органах, тканях и биологических жидкостях организма поросят.
3.10. Профилактическая эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят.
Профилактическая эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят была изучена в двух опытах.
В первом опыте было изучено профилактическое действия препарата при колибактериозе поросят полученных от свиноматок, которым задавали цидисепт-о во время супоросности. Для опыта было подобрано 10 супоросных свиноматок, аналогов по возрасту, массе тела, количеству опоросов. Свиноматкам опытной группы (n-5) за 8-10 дней до опороса с кормом 5 дней подряд задавали цидисепт-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела, животным контрольной группы (n-5) с кормом препарат не вводили. За поросятами, полученными от свиноматок контрольной и опытной групп осуществляли наблюдение в течение 14 дней, учитывая заболеваемость и падеж.
У 8 поросят (16,3%), полученных от свиноматок группы контроля, на 7 день после опороса были обнаружены признаки заболевания. У поросят, полученных от свиноматок опытной группы за период наблюдения (14 дней) случаев возникновения заболевания зафиксировано не было.
На поросятах в возрасте 14 дней провели второй опыт по оценке профилактической эффективности цидисепта-о при пероральном введении цидисепта-о.
Поросятам опытной группы (n-51) задавали цидисепт-о 1 раз в день 5 дней подряд в дозе 0,5 мл/кг массы тела. Поросятам группы контроля (n-41) препарат не вводили. Для оценки действия препарата за животными вели ежедневное наблюдение в течение 30 дней, учитывали их заболеваемость и падеж.
В группе контроля из 41 животного колибактериозом переболело 15 поросят (36,6 %). В группе животных, получавших цидисепт-о, из 51 поросенка заболевание зарегистрировано у 5 (9,8 %). Профилактическая эффективность цидисепта-о в опытной группе при колибактериозе поросят составила 90,2 %, а заболеваемость в контрольной - 36,2 %.
3.11. Лечебная эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят.
С целью оценки лечебной эффективности цидисепта-о при колибактериозе поросят было проведено два опыта на поросятах разного возраста.
Первый опыт был проведен на 8 поросят 6-7 дневного возраста, больных колибактериозом. Для лечения данных животных использовали цидисепт-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела в течение 7 дней (5 дней составил курс лечения и 2 дня – в целях профилактики рецидива) перорально индивидуально каждому больному. Терапевтическая эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят 6-7 дневного возраста составила 87,5 %, летальность - 12,5 %, средняя продолжительность болезни - 4,1±0,71.
Во втором опыте лечебную эффективность цидисепта-о оценивали на 26-29 дневных поросятах больных колибактериозом. Лечебные свойства цидисепта-о изучали в сравнении с дизпарколом. Больных поросят разделили на две группы по 10 голов в каждой.
Поросятам опытной группы индивидуально каждому животному перорально задавали цидисепт-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела. В контрольной группе внутримышечно вводили дизпаркол в дозе 0,2 мл/кг массы тела 1 раз в сутки. Препараты применяли до исчезновения клинических признаков заболевания и в течение 2 дней после. Терапевтическая эффективность цидисепта-о составила 80 %, тогда как дизпаркола - 70 %.
3.12. Лечебная эффективность цидисепта-о при колибактериозе телят.
Для изучения возможности использования цидисепта-о в комплексном лечении колибактериоза телят, были проведены два опыта. В первом опыте изучали эффективность препарата при лечении телят 2-7 дневного возраста.
Больным животным в группе контроля в качестве антимикробного средства назначали препарат «Антидиарейко» (Invesa). В опытной группе применяли цидисепт-о, который задавали внутрь два раза в день за 15-20 минут до кормления в дозе 0,5 мл/кг. Антимикробные препараты назначали до исчезновения диареи и ещё один день для профилактики рецидивов. Терапевтическая эффективность цидисепта-о составила 70 %, что выше чем в сопоставимом варианте на 10,4 % и на 4,4% ниже летальность, чем в контроле при лечении «Антидиарейко».
Во втором опыте терапевтическая эффективность цидисепта-о изучалась на телятах в возрасте 1-2 месяцев при желудочно-кишечных заболеваниях бактериальной этиологии, протекающих с синдромом гастроэнтерита. У данных животных имела место ассоциативная кишечная инфекция с доминирующей ролью Е. coli (сероварианты 0117, 0119, 0149 и А20) и Enterococcus faecalis.
Больным животным в группе контроля назначали фуразолидон, который задавали внутрь два раза в день в дозе 5 мг/кг. В опытной группе применяли цидисепт-о в дозе 0,5 мл/кг, внутрь два раза в день за 15-20 минут до кормления. Антимикробные препараты назначали до исчезновения диареи и ещё один день для профилактики рецидивов.
Цидисепт-о оказал выраженный терапевтический эффект и составил 89,3%. При его применении не выявлено осложнений или побочных эффектов. В опытной группе, в сравнении с контрольной где назначали фуразолидон, был выше терапевтический эффект на 16,8%, а летальность ниже на 2,14%. Среди животных которым применяли цидисепт-о повторное заболевание наблюдалось на 9,2% меньше, а среднесуточный привес был на 24,7% больше чем после проведения базовой схемы лечения.
4. ВЫВОДЫ.
1. Цидисепт-о – неантибиотический, антибактериальный препарат на основе хлоркоричного альдегида (циминаля) широкого спектра действия, активный в отношении возбудителей колибактериоза в концентрации 7,8-15,6 мкг/мл.
2. Цидисепт-о относится к IV классу токсичности (малоопасные вещества - ГОСТ 12.1.007-76). ЛД 50 при внутрижелудочном введении превышает 30000 мг/кг массы тела, при введении его внутрь в максимально возможных объёмах (0,6 мл белым мышам и 6,0 мл белым крысам) в дозе 30 г/кг массы тела гибели животных не наступает. Препарат не обладает кумуляцией, раздражающими (слизистая глаз, кожа), аллергизирующими, эмбриотоксическими и тератогенными свойствами.
3. Цидисепт-о не токсичен при хроническом применении. Введение препарата 21 день подряд с кормом белым крысам в терапевтической (0,5 мл/кг) и трёхкратной терапевтической (1,5 мл/кг) дозах не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных, способствует приросту массы тела, величина которого зависит от дозы препарата, достоверно не влияет отрицательно на коэффициенты массы внутренних органов, гематологические и биохимические показатели.
4. Цидисепт-о в дозах 0,5 и 1,5 мл/кг массы тела не влияет негативно на структурную организацию печени, почек, легких, сердца, селезенки, семенников, тимуса и слизистой оболочки желудка белых крыс на 7-й, 14 и 21 день исследования. Наблюдаемые, при дозе препарата в 5 раз превышающую терапевтическую (2,5 мл/кг) и лишь на 21 день применения цидисепта-о, дистрофические процессы в печени, почках и слизистой оболочке желудка носили обратимый характер.
5. Применение цидисепта-о 2-3-месячным поросятам, в дозе 0,5 мл/кг массы тела 14 дней подряд, не влияет отрицательно на их клиническое состояние, морфо-биохимические показатели и способствует повышению привесов.
6. Остаточные количества циминаля выводятся из организма поросят через 7 суток после окончания применения препарата.
7. Применение цидисепта-о за 8-10 дней до опороса свиноматкам 5 дней подряд в дозе 0,5 мл/кг массы тела профилактирует колибактериоз у полученных от них новорожденных поросят.
8. Введение препарата с кормом, в дозе 0,5 мл/кг массы тела 5 дней подряд 14-дневным поросятам, профилактирует заболевание их колибактериозом на 90,2 %.
9. Использование цидисепта-о при колибактериозе поросят 7 дневного возраста в дозе 0,5 мл/кг массы тела в течение 7 дней способствует выздоровлению 87,5 % заболевших животных.
10. Терапевтическая эффективность цидисепта-о, при применении его больным колибактериозом поросятам в возрасте 26-29 дней в дозе 0,5 мл/кг массы тела в течение 7 дней составляет 80,0 %.
11. Применение цидисепта-о при колибактериозе телят в возрасте 2-7 дней способствует выздоровлению 70,0 % больных животных и сокращает сроки выздоровления на 0,2 дня.
12. Применение цидисепта-о в дозе 0,5 мл/кг массы тела в течение 6 дней обеспечивает терапевтическую эффективность (89,3%) при желудочно-кишечных болезнях бактериальной этиологии 1-2-месячных телят, протекающих с синдромом гастроэнтерита и сокращает сроки выздоровления на 0,5 дня.
13. Экономическая эффективность применения цидисепта-о на рубль затрат при профилактике колибактериоза поросят составляет 5,74 руб., при лечении колибактериоза поросят - 3,21 руб., при терапии колибактериоза телят - 14,71руб.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
1. Для профилактики и лечения колибактериоза поросят и телят применять цидисепт-о внутрь 5-7 дней подряд в дозе 0,5 мл/кг массы тела.
2. Данные исследований по фармако-токсикологической оценке цидисепта-о и его лечебно-профилактической эффективности вошли в нормативно-техническую документацию по применению цидисепта-о в ветеринарии.
3. Основные положения диссертации могут быть использованы в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ВУЗов и колледжей по курсам фармакология с токсикологией и эпизоотологии.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТЦИИ
1. Индюков А.Л. Оценка острой токсичности препарата цидисепт-о / А.Л. Индюков // Матер. первого съезда ветер. фармакологов России. - Воронеж, 2007. – С. 302-304.
2. Беляев В.И. Субхроническая токсичность цидисепта-о / В.И. Беляев, Г.А. Востроилова, А.Л. Индюков // Фармакологические и экотоксические аспекты ветеринарной медицины: Матер. науч.-практ. конф. фармакологов РФ, посвященной 85-летию со дня рождения проф. Рабиновича М.И. - Троицк, 2007. – С.35-38.
3. Беляев В.И. Эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят и влияние его на репродуктивные функции свиноматок / В.И. Беляев, А.Л. Индюков // Ветеринарная патология. – 2008. - № 2. - С.19-21.
4. Индюков А.Л. Эмбриотоксическое и тератогенное действие цидисепта-о – препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят / А.Л. Индюков, Ю.М. Косенко // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. междунар. науч.- практ. конф. – Воронеж, 2008. - С.307-311.
5. Индюков А.Л. Параметры токсичности цидисепта-о – препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят / А.Л. Индюков, Ю.М. Косенко // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. междунар. науч.- практ. конф. – Воронеж, 2008. - С.153-156.
6. Беляев В.И. Влияние цидисепта-о в различных дозах на клинико-биохимические показатели крыс / В.И. Беляев, Г.А. Востроилова, А.Л. Индюков // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Матер. междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 65-летию Ульяновской ГСХА - Ульяновск, 2008. - Т. 3.– С. 9-11.
7. Фармако-токсикологические свойства и эффективность нового антибактериального препарата цидисепт-о / В.И. Беляев, Г.А. Востроилова, А.Л. Индюков, Ю.М. Косенко // Аграрный вестник Урала. – 2008. - № 8. - С.71-73.
8. Цидисепт-о – эффективный препарат при колибактериозе поросят / В.И. Беляев, Г.А. Востроилова, А.Л. Индюков, Ю.М. Косенко // Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел: Матер. междунар. науч.- практ. конф. - Москва, 2008. - С. 51-53.
9. Клинико-биохимические показатели у животных при длительном применении цидисепта-о / В.И. Беляев, Г.А. Востроилова, А.Л. Индюков, Ю.М. Косенко // Ветеринария и кормление. – 2008. - № 4. - С.15-16.
|
