Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр icon

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр





Скачать 343.88 Kb.
НазваниеИнфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр
Дата конвертации24.05.2013
Размер343.88 Kb.
ТипДокументы
Введение


Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь при внедрении в животный организм возбудителя- патогенного микроорганизма (или продуктов его жизнедеятельности). Отличительной чертой данных болезней является также способность специфического возбудителя передаваться от больного животного к здоровому. Это определяет потенциальную возможность непрерывной передачи возбудителя инфекционной болезни, массовость поражения животных и тенденцию к широкому территориальному распространению. В силу этих особенностей инфекционные болезни представляют собой наиболее опасную группу болезней, существующих в природе вследствие непрерывности эпизоотологического процесса и способных в определенных условиях наносит животноводству большой экономический ущерб, а некоторые из них- передаваться от животных к человеку. Исходя из такой характеристики, инфекционную патологию животных с полным основанием можно отнести к весьма сложной и многогранной проблеме, биологические, ветеринарные и социально-экономические аспекты, которые изучают многие науки, используя соответствующие методические подходы.

К таким инфекционным болезням можно отнести остро протекающую болезнь – бешенство (Rabies).


1.1. Актуальность темы

Несмотря на большие успехи в изучении бешенства в последние годы во многих странах число случаев заболевания бешенством увеличивается, и болезнь наносит немалый урон. В соответствии с выводами комитета экспертов ВОЗ по бешенству, одной из причин его получения является несовершенство методов лабораторной диагностики бешенства (1987г. Женева).

Для диагностики бешенства практическими лабораториями используются следующие методы: микроскопия мазков-отпечатков, для обнаружения телец Бабеша-Негри, РДП, РСК, МФА, РН на мышах и биопроба на лабораторных животных.

Каждый из применяемых методов имеет недостатки в плане чувствительности, воспроизводительности, экспрессности и технической простоты постановки. Метод выявления телец Бабеша-Негри имеет диагностическое значение только при обнаружении типичных, специфических включений.

РДП позволяет выявлять антигены и антитела к вирусу бешенства в долго хранившемся материале, однако материал, консервированный глицерином, формалином и другими средствами для исследования непригоден. Метод малочувствителен и результаты учитывают только через 24-72 часа.

Биопроба и РН на мышах для быстрой диагностики малопригодны, так как учет результатов проводят через 21-14 дней соответственно.

МФА – (метод флуоресцирующих антител) метод быстро выполнимый лабораторной диагностикой бешенства. Однако противопоказано применение МФА для диагностики в течение 3 месяцев после вакцинации, так как может быть флуоресценция антигена вакцинного вируса. В МФА не подлежит исследованию консервированные пробы и материал, имеющий признаки даже незначительного значения. Для исследования больного число проб метод требует подготовки специалистов в течение 1,5-2 года и опыта исследования.

Разработанный в последние годы метод ТФ ИФА нашел широкое применение в медицинской и ветеринарной практике. Высокая разрешающая способность этого метода обусловлена, главным образом, природной лиганде, степенью очистки компонентов и чувствительностью приборов, регистрирующих наблюдаемый эффект. В целом ряде сообщений указано, что этот метод характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью, экспресностью

Несмотря на то, что ветеринарная практика имеет в своем распоряжении большой набор диагностических сывороток и диагностикумов, увеличение номенклатуры, улучшение качества и стандартизации диагностических препаратов для практических лабораторий остается важной задачей.

Для постановки серологических реакций в настоящее время используют антигены, приготовленные из мозговой ткани лабораторных животных, павших после интерецеребрального заражения фикцированным вирусом. Этот метод получения антигена нетехнологичен и небезопасен.

Указанные выше обстоятельства послужили основной предпосылкой для дальнейшего совершенствования средств и методов лабораторной диагностики бешенства. Актуальность работы обусловлена также необходимостью обеспечения ветеринарных диагностических лабораторий безопасными диагностическими препаратами и высокопроизводительными методами.

Данная работа является результатом завершенных исследований по разработке и совершенствованию диагностики бешенства выполненных в ВНИИВВиМ в соответствии с плановыми заданиями по научно-исследовательской работе.


1.2. Цель и задачи исследования.

Целью наших исследования является совершенствование средств и методов лабораторной диагностики бешенства.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

  • Разработать метод изготовления универсального культурального инактивированного антигена, пригодного для постановки серологических реакций.

  • Изучить и определить оптимальные условия постановки ТФ ИФА для обнаружения специфических антигенов и антител

  • Отработать методику постановки ВИЭОФ для экспресс-постановки диагностики бешенства

  • Отработать реакцию имуннофлуоресценции с использованием микрокультур клеток ПС для обнаружения антигенов вируса бешенства

  • Изучить диагностическую ценность отработанных методов и предложить схему лабораторной диагностики бешенства.


1.3. Научная новизна

Разработан способ изготовления универсального культурального антигена, включающий культивирование вакцинного или фиксированного вируса бешенства в культуре клеток ПС. Отработку клеточного детрита ультразвуком в течение 50,5 минут инактивацию препаратом А-24 /1,8,3,6 – диэндометилен-1,3,6,8- тетразациклодеканом/ в течение 45-50 часов при температуре 40С с последующей леофилизацией. На метод изготовления антигена получено положительное решение о выдаче авторского свидетельства. Перевиваемую культуру клеток ПС первые использовали для выращивания вируса бешенства. В результате проведенных исследовании разработан метод ТФИФА для выявления специфических антигенов и антител к вирусу бешенства. Отработано реакция иммунофлуоресценции с использованием микрокультуры клеток ПС для выявления специфических антигенов вируса бешенстава.


II. Обзор литературы


2.1. Краткий исторический очерк

Бешенство – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением центральной нервной системы. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек. Описание бешенства (Lissa, Hydropholia, la Rage, Rabies, Tollwut, La Rabia) встречается в памятниках письменности за 3000 лет до н.э. В эпоху возрождения, затем в XVIII-XIX веках. Бешенству было посвящено большое число работ, в которых высказывались самые разнообразные точки зрения на болезнь и методы борьбы с ней. Научный подход к борьбе с бешенством принадлежит Луи Пастеру – великому французскому ученому, основоположнику современной микробиологии и иммунологии. Луи Пастер доказал тропизм возбудителя бешенство к ткани мозга и добился его ослабления путем перевивок (пассажей) заражении в отличавшейся сокращенным и постоянным (6-7дней) инкубационным периодом для кроликов, был назван фиксированным (Virus Fixe). После дополнительной инактивации путем высушивания над кристаллами едкого калия Луи Пастер использовал спинной мозг зараженного кролика для изготовления антирабической вакцины. Пастер провел большую работу по созданию антирабической вакцины и ее внедрению в практику борьбы с бешенством.

Новейшие достижения по размножению вируса в культуре клеток позволяли получать антирабические препараты, не обремененные белками мозга (продуцентов). Начиная с Ш.Капровского (1965) культуральные вакцины применяются в практике здравоохранения (в СССР вакцина М.А.Селимова для людей; вакцина ВНИ и ТИБП для животных).

В начале 80-х годов в США методом биотехнологий была создана субъединичная вакцина, которая состоит из гликопротеидов вируса бешенства и обладает более высокими иммуногенными свойствами, чем приготовленная из цельного вируса.

Путем экспрессии ДНК, которая кодируются гликопротеидами вируса бешенства получена рекомбинантная антирабический вакцина на основе вируса осповакцин. Она достаточно эффективна, активно индуцирует синтез защитных нейтрализующих антител; однако использование для этой цели вируса осповакцин продолжает оставаться спорным.

Достижение рабиологии не исчерпываются только разработкой вакцин. В нашей стране и за рубежом нашли разрешение многие вопросы эпизоотологии и иммунологии бешенства.

Несмотря на давнюю известность этого заболевания, несмотря на то что бешенству посвящено большое количество работ, касающихся различных вопросов, интерес к этой инфекции не прекратился, а наоборот, они все больше и больше привлекают к себе внимание. Основными проблемами над которыми в настоящее время ведется работа в области бешенства являются:

  1. Дальнейшее изучение морфологии и биологии возбудителя с использованием новейшей лабораторной техники.

  2. Выявление новых видов диких животных, могущих быть вирусоносителями.

  3. Изучение процесса циркулирующим рабического вируса в природе

  4. Дальнейшее сравнительное изучение различных штаммов фиксированного и уличного вируса

  5. Разработка быстрых и надежных методов дифференциальной диагностики, в особенности, прижизненной диагностики.

  6. Разработка новых методов приготовления вакцин.


Проблема профилактики и борьбы с бешенством чрезвычайно важна для всех без исключения, стран и районов, чем объясняется повсеместный интерес к мировому распространению этого смертельно опасного зооантропоноза. Свободны от бешенства только Великобритания, Скандинавские страны (кроме Дании), Япония и Австралия.

В настоящее время бешенство установлено у животных, относящихся к более чем 30 видам. По оценке ВОЗ в мире ежегодно бывают укушенными животными подозрительными по бешенству 1500000 человек, а умирают от бешенства около 1000 человек. Особенное серьезное положение с бешенством в развивающих тропических странах. Самая высокая заболеваемость в Индии (более 50 случаев в год на один млн. человек), Эфиопия (12.6 млн), Шри-Ланка (10,3 млн), Тайланд (7,6 млн). К наиболее опасным по бешенству районам мира относятся значительные территории Южной Америки, обширные районы Канады, Центральной Европы, некоторые районы Африки и Среднего Востока. В США около 5 случаев в год заболевания человека. Подобная географическая неравномерность распространения очагов болезни связано с различными причинами, многие из которых еще недостаточно известны науке.

Основная масса заболевания бешенством животных на территории России за последние годы приходится на Северный Кавказ, Поволжье, Южный Урал, Целинный край. Возможно, это связано с определенным биотопом и видовым составом фауны этих районов.


2.2. Краткая характеристика возбудителей бешенства.

Возбудитель болезни – вирус, относящийся к роду лиссавирусов семейства рабдовирусов. Как и другие рабдовирусы, он имеет пулевидную форму. Длина вирионов – 180мм, диаметр 75-80мм. Вирус удается культивировать в развивающихся куриных и утиных эмбрионах, в культурах некоторых клеток. Штаммы возбудителя бешенства, циркулирующие в природе (уличный вирус), патогенны для всех теплокровных животных. В наиболее высоких титрах вирус накапливается в центральной нервной системе зараженных животных, особенно в аммоновых рогах и коре больших полушарий головного мозга, в мозжечке и продолговатом мозге. Высокий титр возбудителя бешенства и в слюнных и слезных железах.


2.2.1. Устойчивость вируса и его локализация

Низкие температуры консервируют вирус. Вирус бешенства чувствителен к высокой температуре, pH, формалину. Температура 280С инактивирует его через 28-53 дня, 500С за один час, 600С – за пять- десять минут, 700С- мгновенно. Высушивание без вакуума инактивирует вирус бешенства в течение 10-14 дней. В высушенном материале он гибнет через 15 дней. Ультрафиолетовые лучи убивают его за 5-10 минут. Дезинфицирующие вещества (растворы формальдегида, гидроокись натрия, хлорной извести) действуют на вирус губительно в обычных концентрациях.

Вирус бешенства быстро инактивируется липидорастворителями 0,1% -ным раствором трипсина, устойчив к pH 5-10 при температуре 40С. Вирус бешенства обладает выраженной нейропробазией. Распространение вируса бешенства по нервным путям впервые было доказано Луи Пастером. При попадании в организм вирус размножается в поперечно-полосатых мышцах, затем через ацетилхолиновые рецепторы проникает в нервные окончания, двигается по законам в центральную нервную систему, где вызывает диффузный энцефалит. Далее вирус бешенства распространяется по нервам центростремительно в различные органы.

В тесте МФА выявляли вирус бешенства в слюнных железах, сердце, легких, селезенке, печени собак, кошек, мангустов. В тесте инокуляции на мышах из ткани сердца эффективность выделения вируса составила 58-62%, почек-62-70%, в слюнных железах 75-84%. При инфицировании штаммом CVS вирус из органов не относящихся к нервной системе выделен не был. Таким образом показано что только уличный вирус бешенства распространяется от центральной нервной системы к другим органам при естественной инфекции, фиксированный вирус бешенства является нейротропным вирусом. В наиболее высоких титрах вирус накапливается в нервной системы зараженных животных особенно в таких отделах головного мозга, как аммоновы рога и кора больших полушарии, мозжечок и продолговатый мозг.


2.2.2. Антигенная структура

Вирус бешенства отнесен к группе рабдовирусов, имеет сложное строение и содержит около 22% липидов, 3% углеводов, до 1% РНК и 74% белков.

Зрелый вирион имеет молекулярную массу 475*106 Д, диаметр вирионов 70-80 НМ, длина 180-200 НМ. Центрифугирорвание вируса бешенства в градиенте хлористого цезия показало гетерогенность вирусных частиц. Для большинства из них плотность достигает 1,2 грамм/см. в кубе. Центрифугирование зоны градиента сахаразы дало возможность определить для вируса бешенства коэффициент седиментации 23S и 10 S (для материала из культуры клеток). Их плотность в растворе CsCl-1,26г/см3.

У всех рабдовирусов геном представлен единой односпиральной линейной молекулой минус –РНК, содержащий 12000 нуклеотидов. Виток спирали равен 75 А, а его диаметр 150 А. Ширина выпрямленного нуклеопротеида варьирует от 20 до 65А, длина может достигать 4,2м нуклеокапсид содержит 96% протеинов и 4% РНК.

Если на очищенный вирион воздействовать дезоксихолатом натрия (или 2 меркаптоэтанолом, сапонином, твин-80-эфиром), затем привести иммунноэлектрофореза на гемполиакриламида, то можно получить определенное число, молекулярный вес и структуру полипептидов вируса бешенства.

Геном кодирует 5 белконуклеопротеидов, 2 мембранных белка М и NS, гликопротеид G, РНК полимеразу. Белок непосредственно связан с РНК, у всех рабдовирусов сходен и по классификации Wagner и др. (1972) обозначается как белок N. Один вирион приобретает устойчивость к РНК-азе. РНП способен связывать комплимент и не обладает гемагглютинирующей активностью.

Нуклеокапсид вируса бешенства представляет собой спиральные тела, состоящий из белков N, NS и L, составляющие 96% его массы, белок N вирионный РНК, защищающий ее от действия РНК-азы, высокомолекулярный белок L и небольшой белок NS не связанный с нуклеокапсидом и содержатся в вирионе в незначительном количестве. Внутренним белком вирусной оболочки является негликозилированный мембранный или матриксный белок. Кроме белка M у вируса бешенства состав внутреннего слоя оболочки входит белок А или клеточный актин с молекулярной массой 43кДж, содержание которого достигает 1-5 % массы вирионных белков. До недавнего времени считалось, что все штаммы вируса бешенства имеют одинаковый АГ состав. Однако с помощью монАТ удается легко различать фиксированные и дикие его штаммы как по нуклеокапсидным, так и по гликопротеиновым АГ. В вирионах вируса бешенства обнаружено 5 белков. Гликопротеин G способен индуцировать образование ВНА и защищать животных от заражения. Нуклеокапсидный АГ индуцирует образование КСА и ПА.

Нуклеокапсидный антиген индуцирует образование комплиментсвязывающих и преципитирующих антител, ответственных за иммунохимическую окраску вирус специфических антигенов, присутствующих в инфицированных клетках. Эти антитела не обладают вирусонейтролизирующей способностью. Поэтому животные иммунизированные нуклеопротеидом не приобретают защиты против бешенства.

К нуклеокапсиду прилегают мембранноподобный слой, представляющий собой нефосфорилированный белок, матричный белок (М) предположительный его функцией является оттягивание звеньев РНП в цилиндр со спиральной симметрией, один конец которого как бы срезан, а другой имеет форму полусферы. Третий слой образует единый для всех рабдовирусов белок G представляющий собой гликопротеид. Он образует структурную основу для поверхностных отростков, выступающих из мембранных белков, покрытых в этих участках липидами. Их длина 80 и 100А. Они содержат геммаглютинин, которые скрепляются с эритроцитами группой SH.

Гликопротеид G индуцирует образование нейтрализующих антител и иммунитет у животных. Уже клонированы гены гликопротеида вируса бешенства и везикулярного стоматита. Используя их, удается избежать тяжелых неврологических реакций, которые возникают после введения вакцины против бешенства, приготовленной из целого вируса.

Гликопротеид оболочки вириона является структурным компонентом, индуцирующим образование антител, которые имеют важное значение в обнаружении вирусного антигена иммунофлуоресцентным и иммкннопероксидазным методами. Два белка L и NS связанных с нуклеокапсидом являются компонентами транскриптазы, содержащейся в вирионе.

Исследованиями последних двух десятилетий установлены «классические» штаммы вируса бешенства и несколько изолятов, выделенных на Африканском континенте, содержащие общие нуклеопротеидные антигены, которые обнаруживаются МФА, РСК и РДП.

Однако вирусы группы бешенства различаются при сравнивании их в реакции вирусонейтрализации и перекрестной защиты (WHO express committee of rabies 1973г.), что свидетельствует об их различии по антигенезу вирусной оболочки –гликопротеиду. На основе данных ВОЗ вирусы группы бешенства могут быть разделены на 4 серотипа:

  1. вирус 1-го серотипа

  2. вирус 2-го серотипа

  3. вирус 3-го серотипа

  4. вирус 4-го серотипа


2.2.3. Антигенная вариабельность и родство

Вирус обладает основными антигенными компонентами. Растворимый S-антиген (нуклеопротеин капсиды) является общим для всей группы вирусов бешенства и ответственен за продукцию комплементсвязывающих, преципитирующих антител и антител, участвующих в реакции иммунофлуоресценции. Инфекционный V-антиген (гликопротеид наружной оболочки вириона) вызывает образование вируснейтрализирующих антител, антигемагглютининов и обеспечивает формирование иммунитета. Этот антиген типоспецифический. На основе различной гликопротеидного компонента, выявляемых в реакции перекрестной защиты и реакции нейтрализации, в группе вирусов бешенства выделяют 4 серотипа.

Ранее все штаммы вируса бешенства рассматривались как единые в АГ отношения. Однако благодаря гибридомной технологии появилась возможность получения монАТ к отдельной АГ детерминанте. МонАТ позволили выявить тонкие АГ связи и различия между штаммами вирусов группы бешенства. В настоящее время считают, что вирус бешенства имеет 4 серотипа, что, видимо, обусловлено различием в составе мембранных белков. Учитывая это, была предложена следующая классификация вируса: вирус 1-го серотипа; прототип этого вируса - штамм CVS и сходные с ним полевые и лабораторные штаммы, выделенные в различных частях света; вирус 2-го серотипа; прототип его – штамм Lagos Bat, выделенный из костного мозга летучей мыши в Нигерии; вирус 3-го серотипа; прототип его – штамм Мокола, выделенный из землеройки и человека; вирус 4-го серотипа – штамм Obodhiang, выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован.

Все варианты вируса бешенства в иммунобиологическом отношении родственны. Нуклеопротеидные АГ различных вирусов бешенства имеют группоспецифическое родство с другими рабдовирусами. МонАТ к различным штаммам вируса бешенства открыли новую страницу в изучении тонкой АГ структуры лиссавирусов, представили дополнительные возможности для решения теоретических и прикладных задач рабиологии. Показана перекрестная защита мышей против широкого спектра изолятов вируса бешенства. При этом мышей вакцинировали рекомбинатной вакциной

(на основе вируса вакцины) экспрессирующей гликопротеин G, нуклеопротеин N или оба (N+G) лабораторного штамма CVS, или полученной на диплоидных клетках вакцинной (HDCV), и определяли устойчивость мышей к 17 штаммам вируса бешенства, представляющих весь спектр известных вариантов возбудителя. В итоге сделан вывод, что любой штамм вируса бешенства или его гликопротеин могут быть использованы для вакцинации во всем мире.


2.2.4. Локализация и выделение вируса.

Многочисленные исследования патогенеза бешенства позволили условно разделить острую рабическую инфекцию на III основных фазы: I-экстраневральная фаза, без видимого размножения в месте инокуляции; II- интраневральное, центростремительное распространение инфекции и III-диссеминация вируса по всему организму, сопровождаемая появлением симптомов болезни и, как правило, гибелью животного. Распространение вируса бешенства по нервным путям впервые доказано Пастером и Ру. Вирус проникает в организм со слюной в местах укуса и непродолжительное время сохраняется в месте внедрения (до 2-х недель), а затем по центростремительным нервам продвигается к спинному и головному мозгу. Из мозга по центробежным нервам он попадает в слюнные железы, где репродуцируется в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Из мозга вирус также нейрогенным путем попадает в слюну, роговицу, надпочечники. Выделение вируса по слюной начинается за 10 дней до проявления клинических признаков, поэтому французский регламент предусматривает 15 дней срок наблюдения за покусавшим животным. У бешенной лисицы накапливается в слюнных железах столько вируса, что можно заразить 67 мл. лисиц. Доказано нахождение вируса во всех внутренних органах и крови, кроме сальника, селезенки и желчного пузыря. Из ЦНС по нервным путям вирус попадает во внутренние органы, а затем в кровь. Таким образом, происходит стадия генерализации инфекционного процесса.


2.3. Методы диагностики бешенства

2.3.1. Биологическая проба.

Для такой опасной болезни как бешенство разработаны и успешно используются лабораторные методы диагностики и средства специфической профилактики. До 50-х годов текущего столетия для диагностики бешенства практическое значение имело заражение лабораторных животных (биологическая проба) и микроскопическое исследование срезов на присутствие телец включения Бабеша- Негри. Биопроба предложена Webster и Dawson еще в 1935 году и является самым надежным диагностическим методом (около 98% надежности) при бешенстве, однако большим ее недостатком является то, что для получения достоверных результатов требуется много времени (21 сутки).

Для постановки биопробы предпочтение отдают мышатам - сосунам 2-3 дневного возраста поскольку они были чувствительны к разным штаммам вируса бешенства.

Диагностика бешенства методом биопробы на мышах обобщена Koprowski H. Результаты клинического исследования при помощи биопробы должен быть подтвержден положительной реакцией иммунофлуоресценции или обнаружении телец-включение у павших мышей или лучше убитых во время агонии. Положительный результат биопробы подтвержденный обнаружением телец Б-Н позволяет поставить абсолютно надежный диагноз. Известны случаи получения отрицательного результата биопробы несмотря на наличие в исследованном материале телец Бабеша-Ннгри. Объясняют это процессами аутостерилизации вируссодержащего мозга, а также повреждающим воздействием факторов внешней среды, таких как высокая температура, продолжительная транспортировка, гниение и высыхание. Здесь может также играть роль явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами если для инокуляции используют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства обнаружено вещество ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику у этих животных методом интрацеребрального заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению видового антигена в МФА. Для скунсов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Серологическая идентификация с использованием биопробы выполняется в РН с известной положительной сывороткой со специфическим гамма-глобулином.

Биопроба на павших животных является широко применимым высокочувствительным методом диагностики бешенства, однако имеет вои недостатки к которым относят необходимость особых условий биопробы, значительные экономические затраты, длительное наблюдение за животными, что в свою очередь обуславливает поздний ответ или отсутствие заболевания бешенством.

2.3.2.Реакция диффузной преципитации

РДП для лабораторной диагностики бешенства не получило общего признания. Ее можно рассматривать лишь как вспомогательный метод диагностики. Заслуга разработки наиболее современных методов постановки РДП при бешенстве принадлежит К.Н. Бучневу и сотрудникам.

Tahastu P et al установили, что РДП дает положительный результат в тех случаях, когда антиген и антитело присутствуют в соответствующей прорции.

Селимов М. А. в опытах на кроликах, кошках, собаках, мышах, установил, что с мозгом вакцинирующих животных РДП не дает положительного результата. Неспецифические положительные результаты реакции были отмечены при исследовании материала от КРС.

Многие исследователи к особым преимуществам этой реакции относят возможность исследования разложившегося материала и отмечают высокую диагностическую точность при условии использования проб на разных отделов мозга, кора обоих полушарий, мозжечок, аммоновы рога, продолговатый мозг.

В целом широта применения РДП ограничивается относительно невысокой чувствительностью этого метода.

2.3.4. Реакция связывания комплемента

РСК была предложена в 1956 году Shone D et al, которые впервые обнаружили комплементсвязывающие антитела в сыворотках переболевших овец. С этого времени РСК важная и широко используемая реакция для диагностики многих вирусных болезней, но до сих пор не доказана ее целесообразность при бешенстве.

Чтобы реакция была достаточно надежной, необходимо использовать очищенный концентрированный антиген для выявления комплементсвязывающие антител или моноспецифическую антисыворотку с высоким титром антител для выявления комплементсвязывающего антигена. Значительный прогресс был достигнут тогда, когда был получен для приготовления сыворотки очищенный и концентрированный вирус бешенства, выращенный в культуре клеток. РСК определяет все вирусспецифические антигены вируса и может быть использован для изучения так как называемых S (растворимых) антигенов которые имеют антигенную специфичность но не связанных с вирионом.

О пригодности РСК для выявления рабического антигена свидетельствует большое совпадение результатов, полученных в обычных диагностических исследования независящих друг от друга Wolter и другими авторами. Совпадение результатов РСК с данными микроскопического исследования по обнаружению телец Бабеша-Негри составляет 77%. В 16% случаев при отсутствии телец включений РСК не дала положительный результат. РСК был отрицательным при положительных результатах микроскопических исследований. Чувствительность РСК превышает приблизительно в 10-20 раз чувствительность РДП.


2.3.5. Метод флуоресцирующих антител

Из всех серологических методов, применяемых в настоящее время МФА получил наиболее широкое распространение в диагностике бешенства. Впервые МФА при бешенства применил Golwasser R. Kissling R.

Существуют много модификаций МФА для диагностики бешенства. Наиболее широкое распространение получил прямой метод, когда меченые ФИТЦ рабические антитела наносят непосредственно на мазки отпечатки, срезы или клеточный монослой. При высококвалифицированном выполнении МФА дает 99-100% совпадений с методом биопроб.

В настоящее время применяют и микровариант МФА, которые выполняют в 96-луночных пластинах с сформировавшимся на дне лунок клеточным монослоем.

Микровариант МФА используется не только для обнаружения антигена, но и для титрования нейтрализирующих антител против вируса бешенства методом быстрой ингибиций флуоресцирующего фокуса. Микровариант МФА прост, эффективен, не столь трудоемок. В отечественной литературе никаких данных не обнаружено о его разработке и применении.

Большинство исследователей признают МФА – возможность получить результат через несколько часов в то время как при биопробе инкубационный период у мышей достигает 20 дней. Кроме того, применение МФА диагноз на бешенство может быть установлен уже 4-8 день после заражения мышей исследуемым материалом. При отрицательных результатах биопробы иногда получают положительный результат при применении МФА, поскольку этот метод выявляет как инактивированный антиген так и живой.

К недостаткам МА Бучнев К.Н. относит необходимость подавления неспецифического свечение патологически измененной ткани пригодность для исследования только свежего мозга и невозможность исследовать мозг вакцинированных животных. Мовсесянец А.А., Григорьева Л.В., Кривицкая Е.Е. указывают на возможность неспецифического свечения при исследовании материала консервированного глицерином.

МФА может обнаруживать антиген вируса бешенства в клетках роговицы (корнеальный тест) и в тканях подчелюстной слюны железы. Об этом методе диагностики бешенства первым сообщил Shneider. Положительный результат корнеальной пробы он получил уже в инкубационном периоде и у 55% после плантарного заражения.

В нашей стране корнеальную пробу изучали Ковалев Н.А. и Шашенько А.С. и пришли к выводу, что исследования отпечатков роговицы МФА является быстрым, доступным методом, дающим возможность прижизненного диагноза бешенства у животных. Также показана возможность идентификации вируса бешенства МФА в коже, соскобах, со слизистых оболочек. Результаты МФА, полученные при идентификации вируса бешенства в коже. В высокой степени корелируют с данными, полученными при исследовании мозга того же животного.

. Анализ литературы показывают, что МФА высокочувствителен, специфичен и позволяет идентифицироваь вирус в 98% инфицированных образцов. Однако МФА требует дорогостоящего оборудования (люминесцентный м.) и практически непригоден для исследования материала 3 полевых условиях. Оценка результатов МФА субъективна, выражает в крестах. Для исследования большого числа проб (более 20-30) МФА требует подготовки специалистов в течение 1,5-2 лет и опыта исследований. Перечисленные недостатки ограничивают возможности применения МФА


2.3.6. Твердофазный иммуноферментный анализ

2.3.6.1. Принципиальные основы метода ТФ ИФА

Твердофазный иммуноферментный анализ находит все более широкое применение в вирусологических исследованиях. Возможность использования этого метода для выявления вируса различных таксономических групп и антител к ним были четко продемонстрированы в целом ряде сообщений. Указано, что этот метод характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью, простотой и доступностью постановки, может заменить во многих случаях метод радиоиммуного определения и оказаться основным в недалеком будущем для использования в диагностических лабораториях.

Первое сообщение по EUSA тесту, были сделаны в 1971 году Engvall e Perlman P. и независимо от них Van Wecmen B и Schurs A сообщил о возможности определения иммуноглобулина G кролика фиксированного на поверхности пробирок из полистирола с помощью антисыворотки, меченной уличной фосфатазой, они же и ввели термин Elisa. Vann Weerman B Schurs A. сообщили о возможности обнаружения гонадотропина человека этим тестом.

В основе ТФ ИФА лежат два биологических фенотипа: высокая специфичность антител к антигену, мощное усиление химических реакций ферментами. Сам анализ включает три основных этапа, а именно: иммунологическую, ферментативную и индикаторную реакции для установдения наличия и отсутствия взаимодействия антител с антигеном.

Представляется целесообразным остановится более подробно на методических особенностях различных этапов ТФ ИФА.

Для проведения первого этапа иммуноферментной реакции необходимо посадить истинный антиген или антитело на твердую фазу.

В качестве твердого носителя может использоваться целый ряд различных примеров: полиметилметилкрилат, поливинилхлорид, полипропилен, нейлон, тефлон и другие.

Mugel E. et al апробировали различные синтетические материалы (полистирол, полиэтилен, поливинилхлорид, полипропилен и покрытые полистиролом полиэтилен и поливинилхлорид), на их пригодность в качестве твердого материала для ТФ ИФА с цель количественного определения антигена гепатита B. Наибольшая чувствительность и точность метода отличена при применении пробирок из полиэтилена и полистирола.

Фиксацию антигенов и антител осуществляют либо путем ковалентной пришивки либо путем их физической сербции на носителей за счет сил электростатического или гидрофобного воздействия при взаимодействии частичной денатурации на FS участке. Некоторые пластины плохо связывают иммунные комплексы. Для выявления иммунных комплексов методов твердофазной иммунной ферментной анализом Orkan A предложил обрабатывать твердую подложку (микропанели пробирки) из поливинилхлорида или других пластин 9% полиэтилен гликогена с молекулярной массой 6000-8000 при 37 0С 12 часов. Абсорбированные на подложке полимеры хорошо связывают иммунные комплексы в сыворотках и других материалах.

Как продемонстрировано для иммуноглобулина G эффективность связывания белка при постановке ТФ ИФА на полистироле составляет около 10 % от основного количества.

Превосходный белок связывающие свойства нитроцеллюлозных мембран существенно облегчили определение связанных антигенов иммунологическими методами. Более того, было показано, что нитроцеллюлозные мембраны могут эффективно связываться в смеси гликопротеидов. Используя методы ТФ ИФА удается определить малые количества антигенов (10 мкг/мл) в присутствии других белков в концентрации 200 мкг/мл.

В разнообразии методов ТФ ИФА можно определить в две группы конкурентные и неконкурентные. Наибольшее распространение получили неконкурентные методы ТФ ИФА.

В настоящее время зависимость от природы определенных веществ и целей исследования в основном применяются также модификация ТИ как антиглобулиновый непрямой вариант для обнаружения антител, прямой вариант для обнаружения антител (или метод ингибирования): «сендвич-вариант» и модифицированный «сендвич» для обнаружения антигена C в твердофазном иммунном ферментном анализе предложен Voller A et al c гемолитичным антителом иммобилизированный на твердой фазе и в последующем выявлен связавшегося с твердой фазой антигена гемологическим меченным антителом.

Модифицированный «С» вирус описан Clark M, Adams A. Для увеличения чувствительности метода испытымуемый поливалентный антиген, иммобилизированный посредством специальных антител на твердой фазе инкубирует в начале диагностической сывороткой и уже затем антивидным коньюгантом. По данному Voller A et al достоинством этого метода являются универсальность позволяющая серотипировать различные вирусы одним и тем же иммуноферментным коньюгантом, а также использование в процессе анализа нативных вирусспецифических антител, которые реагируют с более широким спектром вирусных штаммов, чем меченные антитела.

Наряду с этим есть сообщения о более высокой специфичности сендвич варианта по сравнению с модифицирующим сендвич методом, что особенно важно при тестировании полевого материала.

При антиглобулинового метода специфичный антиген иммобилизирует температуру испытуемой сыворотки. После стадии отмывки образовавшиеся иммунокомплекс обнаруживается соответствующим антивидовым антигеном. Прямой вариант твердо фазной иммуноферментного анализа или метод ингубирования впервые описан Vorde D et al. В последние годы он получил широкое распространение в вирусологии благодаря высокой чувствительности в основе прямого вр ТФ ИФА для обнаружения антител лежит ингибирование связывание специфических коньюгантов с антигеном в случае наличия в исследуемых сыворотках специальных антител. Универсальность метода заключается в том, что с ее помощью можно тестировать сыворотки любого вида животных, чувствительных к каждому как редкому возбудителю. Кроме того при постановке пробы вр ТИ. используются тот же специфический коньюгант и те же иммуноглобулин G, что и сендвич варианте, что значительно упрощает конструктирование диагностических наборов для ТФ ИФА более чувствителен по сравнению антител ротавирусом. Конкурентный вариант отличается простой но уступает прямому воспроизводимости. Кроме того авторы отмечают что проба в ТФ ИФА более пригодна для серотипирования.

Высокая чувствительность и специфичность ТФ ИФА во многом зависит от иммуно ферментного коньюганта, качество коньюгантов определяется активностью и чистой используемых ферментов и антител, а также методом выбранным для связывания.

Чаще всего для метки применяют щелочную фосфатазу из кишечника теленка и Eischerichia coli, периоксидазухлора, ВД галактозидазу, глюкозаоксидазу.

Есть сообщение о применении ТФ ИФА коньюгатов с ацетилхолинестеразой, глюкооксидазой, лизокцилом, люцеферазой и малотдегидразой. Несмотря на большой выбор, наиболее распространенным и используемым в настоящее время ферментом является пероксидаза хрена. Большинство исследователей при получений пероксидазных коньюгатов отдают предпочтение перлодатному методу, разработанному Nakane A и Kawaol A.

Большое значение для получения максимальной чувствительности имеет третий этап реакции индикаторной. На этом этапе основную роль играет правильный выбор субстрата. На ряду, с желанием использовать субстраты высокой хроногенной активностью, необходимо принимать внимание такие факторы, как растворимость, продукты его фермантативной модификации в условиях поведения твердофазной иммуноферментного анализа, а также стабильность этих субстратов при хранении. Наиболее активным хромогенным субстратом для пероксидазы хрена является артофенилендиамин, приготовленный на 0,02 н цитратном буфере рН 4,9 – 5,0.

В 1979 году Уолкен К. и Стора Р. Предположили субстрат, продукт расщепления которого, обладает способностью флуоресценции. Для наиболее часто используемых в твердо фазном иммуноферментном анализе ферментов, таких как щелочная фасфотаза, пероксидаза, В-Д галакторидаза, определены флюориецентные субстраты анализе ферментов, таких как щелочная фасфотаза, пероксидаза, В-Д галакторидаза, определены флюориецентные субстраты 4- тетрофинилфосфат, парагеноксифенилпропионовая кислота, 4- метилумбелисферил, В-Д соответственно, использование этих субстратов позволяет повысить чувствительность метода на 2-4 порядка. Как уже указывалось ТФ ИФА является экспрессным, высокопроизводительным методом, позволяющим делать 90 (в ручную) и 1000 (в автоматическом) режиме анализов проб за один рабочий день.


2.3.6.2. Методы получения ферментных коньюгатов.

В настоящее время при синтезе диагностических коньюгатов наибольшее распространение получили методы ведения ферментной метки, основанные на образовании ковалентной связи между молекулами антитела и антигена, фермента.

В большинстве ковалентных методов используется нуклеофильные свойства амина – сульфануральной, гидроксильной и иммуннодифузной групп, а также реакции, основанной при электрофильной, также реакционно способных ароматических групп молекул белков.

Выбор реакции связывания определяется в оксиконкурентном случае, с учетом типа доступной функциональной группы белковых молекул. Качество модифицирующих связей реагентов для получения белокферментных коньюгатов широко используются следующие вещества:

- глуторовый альдигид, модифицирующий Е – аминогруппу.

- хлористый циану, обладающим аналогичную глутаровому альдигиду модифицирующей активностью.

- н – бензохинион модифицирующей Е – аминогруппы лизина, сульфогидрильные группы целетеина, углеводные остатки. Водорастворимые карбо , оказывающие модифицирующие действия на амино и карбоксильные группы.

- периодат натрия, модифицирующие углеводные остатки.

- N-N-O – фенилендималемид проявляющий активность по сульфогидрильным группам цистеина.

- малеинидобензоил гидроксисукцин имидефир (МБС), модифицирующий аминогруппы и сульфгидрильной группы цистеина.

В идеале, наиболее эффективные методы коньюгации должны давать 100% выход коньюгата известного состава без инактивации содержащихся в них макромолекул.

Достижению этой цели были посвящены многие генные исследования, в которых испытывали различные модифицирующие реагенты и отрабатывались условия и этапы процесса коньюгирования.

Первым соединением, использованным для синтеза коньюгатов иммуноглобулинов с ферментами, был глутаровый альдегид. Он представляет собой бифункциональный реагент, взаимодействующий с Е- аминогруппами белковых молекул. Применительно к использованию глутарового альдигида были разработаны одно – и двухстадинные способы синтеза каньюгатов, принцип которых в последствии распространялся и на другие смывающие агенты.

Коньюгаты, полученные двустадинным способом, более чувствителен в сравнении с иммуноферментными комплексами полученными односторонним методом. По мнению Van Wemen В-et al это связано с различным соотношением переоксидазы связывается с одной молекулой иммуноглобулина.

В связи с этим наибольшее практическое значение получил двустадинный метод, заключающийся в обработке ферментов сливающим реагентом, выделенным модифицированного фермента и последующем взаимодействием его с антигеном (антителом). Это значительно уменьшает полимеризацию антител и позволяет уменьшить молекулярную массу конюгатов до 2-4 млн. Д при несколько более низкой эффективности лечения в сравнении с одноэтапным методом.

По данным Rostmann T et al выход коньгата в этом случае из за низкой эффективности связывания не превышает 5%. Выход коньюгата в двухстадийном методе увеличивается на 10% по данным Б.Б. Дзантиева и др. за счет применения низких концентраций гутарого альдегида (0,4-0,7%), тогда как при высоких концентрациях (от 1 до 5 %) фермент инактивируется на 60-70%. Коньюгаты от несвязавшихся реагентов считают преимущества гемофильтрацией на сефадексах Х Г-150, Г-200. Сефарозе 63% и ультрагеля А с А 34 и А с А 44.

2.3.6.3. Состояние и перспектива использования метода ТФ ИФА при бешенстве.

ТФ ИФА разработан и для обнаружения специфических антигена и антител вируса бешенства. Первое сообщение об этом появилось в 1975, где Atanasiu P. Рекомендовал иммунопероксидазную реакцию в качестве диагностического теста для выявления антигена вируса бешенства в культуре клеток.

В 1985 году Хисматулллина Н.А и другие проводили исследования по изучению пригодности ТФ ИФА для обнаружения вируса бешенства в патологическом материале. В последние годы ТФ ИФА для диагностики бешенства привлекает больше внимание исследователей. Установлено, что ТФ ИФА хорошо корректирует МФА при выявлении вируса бешенства в образцах, полученных в полевых условиях. Чувствительность этих методов составили 99.75% и 98% соответственно. Анализ литературных данных показал, что наблюдается разнообразие средств, используемых для приготовления диагностикумов для ТФ ИФА при бешенстве. Для выделения иммуноглобулина G использовали сыворотки крови разных животных. Исследования по гипериммунизации морских свинок, кроликов, овец, сирийских хомячков, ослов, коз позволили получить активные антирабические сыворотки и приготовить на их основе высокоактивные специфические коньюгаты. Наилучшие результаты получены при использовании сыворотки крови морских свинок и овец. При использовании иммуноглобулина G ослов отмечено отсутствие неспецифических реакций.

ТФ ИФА применяли только для обнаружения антигена вируса бешенства, но и как тест для оценки качества культуральной рабической вакцины. Стандартизировали неконкурентный ТФ ИФА, который включает фиксацию вируса в различных разведениях вакцины на поверхности микропластин для титрования, инкубацию с кроличьей сывороткой, содержащей избыток антител против вирусного гликопротеида, затем инкубацию с видоспецифическим антииммуноглобулина G ассоциированным с пероксидазой и на последнем этапе проявление реакции субстратом. Гликопротеид вируса бешенства является антигеном, ответственным за индукцию, нейтрализующих антител. Результаты реакции специфичны и коррелируют данными исследованиями по защитной способности вакцин.

ТФ ИФА является также быстрым и хорошим воспроизводительным методом для определения специфических антител. Разработаны следующие модификации: непрямой вариант с использованием антивирусного коньюгата. ТФ ИФА на основе соединения протеина А стафилококка с пероксидазой хрена, метод ингибирования ТФ ИФА.

Для быстрых исследований сывороток крови вакцинированных животных и человека и при эпидемиологических исследованиях на бешенство нужен быстрый и относительно недорогой тест для обнаружения рабических антител. ТФ ИФА предложен, как возможная альтернативная реакция, нейтрализующая при бешенстве. и используемых белков, содержащих достаточное количество аминогрупп. Он основан на окислении углеводного обмена белка периодатхлором натрия. Данный метод широко используется при получении иммунопироксидазных коньюгатов. В процессе синтеза обнаруживаются коньюгаты полидисперсного состава, содержащие от 0,5-3 молекул фермента на молекулы иммуноглобулина. Связывание пироксидазы в коньюгат достигает 70-90% от начального количества фермента, полученного таким путем гибридные молекулы сохраняют высокую каталическую активность, так как модифицированный углеводный компонент удален от активного центра пироксидазы.

Эффективный метод получения коньюгатов с ферментами содержащие сульфогидрильные группы, предложен несколькими исседователями. Для смывки этим группам белков они использовали целый ряд различных производных молеинида. Данный метод нашел широкое применение для синтеза коньюгата антител с ВД галактозидазой. Выход которой достигает 7% при высокой степени сохранения каталачисеких и иммунологических свойств. Важной проблемой совершенствования диагностических препаратов для ТФ ИФА является синтез иммуноферментов коньюгата с известным соотношением компонентов. В связи с этим представляет интерес твердофазный метод получения гибридных молекул, апробированный на примере получения коньюгатов антител с инвертазой. Сущность меотда заключается в аффинной иномобилизации инвертазы на конковалентных А-сифарозы и последующие ее модификации Гутаровым альдегидом. Вносимый в следующем этапе в данную систему антитела ковалентную связывает с ферментом. Эльюированный матрицы коньюгат содержит около 90% молекул коньюгата инвертазы-иммуноглобулина составляет 1:1. возможно также иммуноболизиция на носителях ферментоперексидазы с последующей модификацией.

Все чаще непрямых методов ТФ ИФА вместо антиглобулинов, меченных ферментов, применяется белок А. Этот белок обладает интересным свойством, он реагирует со многими иммуноглобулинами мелкопитающих и меченный фермент может применяться в качестве универсального маркера.

В литературе описано достаточно много примеров использования белка А меченного пероксидазой хрена для титрования антител методом ТФ ИФА при ринотрихите крупного рогатого скота, вирусном герпесе человека, герпесе лошадей, псевдобешенстве, аденовирусных инфекциях и КРС, свиней, кошек, собак, кроликов, чуме КРС и ящуре.

Серьезным недостатком белка А является его высокая стоимость, однако Керсток Э. указывает, что большинство иммуноферментных тестов удовлетворительные результаты можно получить при использовании экстрактов этого белка.

В коньюгатов может содержатся высокий уровень комплексов антитело фермент, но тем могут быть и остаточные контаминирующие немеченые антитела и свободные ферменты. Однако для ТФ ИФА при бешенстве нужен единственный фермент реагент способный обнаружить антирабические антитела сыворотки крови разных видов животных. Так как ТФ ИФА использующий белок А, стафилококк но довольно дорог, то использование специфического коньюгата для метода ингибирования увеличивает многосторонность ТФ ИФА.

При сравнении различных методов серологического титрования антител при бешенстве исследователями получены противоречивые данные. По сообщению Blancou J et al, Karaman Y et al установлено хорошее коагуляция методов Рн на мышах, быстрого гонения флуоресцирующих центров и непрямого ТФ ИФА и обоснована возможность использования любого из этих методов для определения титра антител к вирусу бешенства. При сравнении реакции флуоресцирующих центров, pH и методов ингубирования ТФ ИФА хорошую корреляцию дали только первый и третий методы. Между результатами, полученными в РСК, РДП и ТФ ИФА не отмечено корреляционная зависимость. При исследовании сыворотки крови КРС в 12 случаях результаты совпадали с pH, в 6 случаях титры в И.Т. были выше, в двух случаях результаты были отрицательными.

ТФ ИФА является достаточно удобным методом для селекции моноканальных антител при бешенстве. В отличие от pH с помощью ТФ ИФА выявляются антирабические антитела не только к лабораторным но и к улучшенным штаммам.

Дальнейшее исследование по разработке ТФ ИФА для диагностики бешенства, очевидно, должны быть направлены на повышение чувствительности метода его более широкую апробацию.


2.3.6.4. Диагностика и дифференциальная диагностика бешенства

Существует ряд заболеваний животных клинические проявления, которых сходны с таковыми при бешенстве. При постановке диагноза у КРС бешенство следует дифференцировать от анаплазмоза, злокачественной катаральной горячки, губкообразного энцефалопатита, энцефалита, у поросят преобладает поражение нервной системы, у взрослых свиней бешенство протекает инфлуэнцеподобно и вирус обнаруживается преимущественно в легких, что необходимо иметь в виду при постановке биопробы, у собак исключает нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефалите лошадей. Необходимо исключить болезнь Ауески, при которой больные животные не агрессивны, не бывает извращение аппетита, гидрофобии. При дифференциальном диагнозе также необходимо исключить листериоз. Комплекс использований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. В настоящее время лабораторная диагностика бешенства заключается в исследовании проб головного мозга животных, выявление вирусного антигена в РДП, РСК, МФА. Обнаружение тельца Бабеша -Негри и биопробе на белых мышах. В соответствии с рекомендациями ВОЗ основными диагностическими тестами являются МФА и биопробы на мышах. РДП, РСК и обнаружение телец Бабеша-Негри применяются как вспомогательные методы диагностики, это связано с их невысокой чувствительностью и рядом других особенностей, освещенных выше. Тест иммунофлуоресценции обладает высокой специфичностью и с его помощью можно поставить диагноз за несколько часов, при чем имеется высокая степень корреляции между МФА и биопробы на мышах. Сравнительная достоверность результатов исследований представляется следующим образом: биопробы 93,3%, МФА 87,9%, микроскопия окрашенных препаратов на тельца включения 62,1%.

Углубленные исследования бешенства немыслимы без использования моноканальных антител для характеристики штаммов. До недавнего времени считалось что все штаммы вируса бешенства имеют одинаковы антигенный состав. Это мнение основывалось на результатах применения общепринятых иммунологических методов. Однако благодаря гибридомной технологии появилась возможность получения моноканальных антител к отдельной антигенной детермизации. Использование метода гибридизации миелоидных клеток лимфоцитами, продуцирующие антитела, позволило получить ткани моноканальных антител благодаря количественных штаммов вирусов и группы бешенства. Исходный набор из трех препаратов моноканальные антитела к нуклеокапсидным антигенам достаточен для дифференциальной диагностики бешенства, выявление различных диких и фиксированных штаммов вируса. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству считает, что в перспективе использования моноклональных антител позволит выявлять случаи возникновения бешенства среди животных вызванной вакциной.


2.4. Заключение по обзору литературы.

Несмотря на то, что в настоящее время хорошо известны основные методы распространения возбудителя бешенства, имеются весьма надежные средства профилактики болезни и разработано стратегия борьбы с инфекцией. Впереди еще много работы в интересах повышения эффективности защиты животных и человека от смертельно опасного заболевания.

Совершенно ясно, что пока не может быть и речи об искоренении бешенства, корни которого скрыты глубоко в природе. Многовековая эволюция вируса обеспечена широкие возможности для него приспособления к разнообразным условиям существования широкое распространение инфекции в самых разнообразных условиях от тропических лесов до гиперурбанизированных территорий Европы и США.

Вследствие этого основным направление защиты людей и животных являются контроль и регулирование эпизоотической ситуации, иммунизации животных, людей препаратами и использование всех более надежных и безопасных средств и методов диагностики.

Исходя из анализа представленных литературных сведений в области диагностики бешенства, проблема совершенствования существующих средств и методов лабораторной диагностики болезни является весьма актуальной для ветеринарии нашей страны и свидетельствует о методической обоснованности поставленной цели в данной работе.



Добавить документ в свой блог или на сайт
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconВедущее место в инфекционной патологии детского возраста занимают кишечные инфекции. Острые кишечные инфекции (оки), или острые диарейные болезни, это больша

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconNew subject инфекционные болезни общие вопросы инфекционной патологии

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconОбразовательный стандарт послевузовской профессиональной подготовки специалистов Специальность: №040106 «Инфекционные болезни» Москва 2001
«инфекционные болезни» разработан коллективом сотрудников кафедры инфекционных болезней с курсом эпидемиологии Московского государственного...

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconСидоренко О. Л
Гомеопатия (homoios подобный, pathos страдание). Эта наука представляет собой особое направление в медицине отличающееся тем, что...

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconВступление в инфектологию. Инфекционные болезни с фекально-оральным механизмом передачи. Инфекционные болезни с капельным механизмом передачи

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconПояснительная записка к учебной дисциплине Эпизоотология и инфекционные болезни животных

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconЗаразные болезни кроликов и меры борьбы с ними в кролиководческих комплексах предупреждение заболеваний

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconЗаразные болезни кроликов и меры борьбы с ними в кролиководческих комплексах предупреждение заболеваний

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconЗаразные болезни кроликов и меры борьбы с ними в кролиководческих комплексах предупреждение заболеваний

Инфекционные (заразные) болезни по своей природе существенно отличаются о незаразных и занимают особое место в патологии животных. Эти болезни возникают лишь пр iconЗаразные болезни кроликов и меры борьбы с ними в кролиководческих комплексах предупреждение заболеваний

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU