Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава icon

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава





НазваниеЛ. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава
страница8/8
Л.Я. Плахтий
Дата конвертации22.07.2013
Размер1.7 Mb.
ТипДокументы
1   2   3   4   5   6   7   8

Вывод:

При наличии антител в исследуемой сыворотке (положительная реакция) в опытной пробирке гемолиз отсутствует. При отрицательной реакции (нет антител) во всех трех пробирках наблюдается гемолиз.

Реакция связывания комплемента проходит в две фазы: 1-ая фаза — взаимодействие исследуемой сыворотки с антигеном и комплементом. 2-ая фаза — индикаторная — определение наличия в смеси свободного комплемента путем добавления гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. Если в первой фазе реакции происходит образование комплекса антиген-антитело, комплемент связывается этим комплексом и во второй фазе гемолиз эритроцитов отсутствует (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент в первой фазе реакции остается свободным и во второй фазе реакции присоединяется к комплексу эритроцит-гемолитическая сыворотка, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — один из современных молекулярно-генетических методов, основанный на принципе многократного копирования (амплификации) определенного участка ДНК или РНК. В результате этого процесса количество определяемой ДНК в пробе возрастает в десятки миллионов раз, что делает возможной последующую детекцию амплифицированной ДНК. Таким образом, ПЦР позволяет выявить ничтожно малые фрагменты ДНК, характерные для определенного вида микробов, и точно идентифицировать этот вид.

ПЦР в клетке была открыта более 30 лет назад Нобелевскими лауреатами А.Кронбергом и Д.Ледебергом. Принцип метода ПЦР in vitro был разработан К.Мюлисом в 1983 году, также ставшим Нобелевским лауреатом. Почти немедленно появились сообщения о его практическом применении. Однако в этот период из-за отсутствия необходимого оборудования ПЦР проводили путем ручного переноса пробирок в термостаты с нужной температурой. Необходимый для синтеза ДНК фермент ДНК-полимераза разрушался после каждого этапа денатурации (при 95°С), поэтому требовалось постоянное добавление его новых порций.

В 1988 г была получена термостабильная ДНК-полимераза из бактерии Thermophilus aquaticus, живущей в горячих источниках. Были разработаны специальные приборы для амплификации (термоциклеры). Созданы современные лазерные технологии сиквенирования (расшифровки нуклеотидных последовательностей ДНК). Это привело к тому, что ПЦР стал доступным для широкого применения в лабораторной практике.

В настоящее время наиболее быстро развиваются пять основных направлений генной диагностики:

- инфекционных заболеваний (туберкулез, гонорея, вирусные инфекции — гепатиты В и С, ВИЧ, ЦМВ и др.),

  • онкологических заболеваний,

  • генетических заболеваний,

- идентификация личности (трансплантация органов и тканей, судебная медицина, определение отцовства),

- диагностика патогенов в пище.

Исследуемый материал: кровь, сыворотка, лаважные массы, мокрота, слюна, желудочный сок, биопсийный материал, мазки, смывы.


Постановка ПЦР включает следующие этапы:

1. Выделение ДНК (РНК) из исследуемого материала (пробоподготовка).

Клетки лизируют детергентами или высокой температурой. Затем отделяют ДНК от клеточных обломков и разрушают клеточные нуклеазы. Все это обеспечивают приборы: миницентрифуги, развивающие скорость 12000 -14000 оборотов в минуту, вортексы для перемешивания, минитермостаты для пробирок, обеспечивающие быстрое изменение температуры от +30°С до +100°С.

2. Непосредственная амплификация выделенных участков (копий) нуклеиновых кислот.

ПЦР обеспечивает быстрое и многократное умножение, амплификацию (amplification — усиление, увеличение) количества фрагментов генома. Для этого в пробирку с выделенной ДНК добавляют необходимые реактивы и помещают в амплификатор (термоциклер). Этот прибор позволяет циклически изменять и поддерживать перепады температур в пробирке на несколько десятков градусов за несколько секунд. Если в пробирке есть искомая ДНК, то в ней происходит ряд процессов:

  • В результате нагревания до 94 -95°С двойная цепь ДНК разделяется на две отдельные цепи.

  • К одноцепочечной ДНК-мишени присоединяется праймер.

Праймер — это последовательность из 15 — 30 нук-леотидов, комплементарная маркерному фрагменту ДНК. При создании оптимальной температуры (45-70°С) происходит связывание (отжиг) праймера с соответствующим участком ДНК: один праймер — на одной нити, другой — на второй нити ДНК. Отжиг протекает в соответствии с правилом комплементарности Чаргаффа, означающим, что в двухцепочечной молекуле ДНК напротив аденина всегда находится тимин, а напротив гуанина — цитозин.

- Синтез (элонгация) — достраивание второй цепи

ДНК.

ДНК-полимераза присоединяет нуклеотиды к праймерам, достраивая двухцепочечные фрагменты ДНК (~ при 72°С). Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых цепей в следующем цикле амплификации — это и есть цепная реакция в ПЦР. В результате количество копий фрагмента увеличивается в геометрической прогрессии и через 25 циклов амплификации синтезируется 106 копий фрагмента. Через 30 — 40 циклов синтезируется такое количество ДНК, которое можно визуально учитывать после электрофореза в агарозном геле или другими способами.




3. Определение (детекция) продуктов ПЦР, полученных на втором этапе.


Выявление наработанного продукта чаще всего проводят при помощи электрофореза в 2-3% агарозном геле, содержащем бромид этидия (специфический флюоресцентный краситель ДНК). Поглощая ультрафиолетовый свет краситель, связанный с ДНК, флюоресцирует. В результате видна оранжевая полоска на уровне контрольной ДНК. Кроме того, используют ферментно-гибридиза-ционный метод или ПЦР в режиме «реального времени» с помощью флюоресцентных красителей.


СОДЕРЖАНИЕ:


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №1

Микробиологическая лаборатория, режим работы и назначения.

Морфология бактерий. Методы микроскопического изучения бактерий,

простой метод окраски бактерий 3


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №2

Структура прокариотической клетки. Сложные способы окраски микроорганизмов 10


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №3

Структура прокариотической клетки 16


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА № 4

Морфология и ультраструктура спирохет, микоплазм, актиномицетов и грибов 20


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №5

Морфология и ультраструктура хламидий и риккетсий. Морфология вирусов 26


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА № 6

Генетика микроорганизмов. Сдача модуля по теме «морфология и генетика микроорганизмов» 31


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №7

Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Питание бактерий. Принципы культивирования микроорганизмов.

Питательные среды. Методы стерилизации 37


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №8

Сущность бактериологического метода исследования. Особенности механизмов питания и метаболизма у бактерий 46


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №9

Этапы культивирования аэробных бактерий 51


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №10

Этапы культивирования аэробных (продолжение) и анаэробных бактерий.

Дыхательный метаболизм 57


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №11

Антибиотики и химиотерапевтическая терапия 62


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №12

Культивирование вирусов, риккетсий и хламидий 66


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №13

Симбиоз и антагонизм в мире микробов 71


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА № 14

Инфекция (инфекционный процесс) 75


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №15

Неспецифические факторы защиты организма 80


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №16

Физиологические механизмы иммунитета.

Иммунная система человека. Антигены и антитела.

Гуморальный и клеточный иммунный ответ 85


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №17

Серологический метод лабораторной диагностики.

Серологические реакции: реакция агглютинации,

реакция непрямой гемагглютинации, реакция преципитации.

Диагностикумы и диагностические сыворотки 91


УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №18

Комплементзависимые серологические реакции.

Современные серологические и несерологические методы диагностики.

Сдача модуля по теме «инфекция и иммунитет» 98

1   2   3   4   5   6   7   8

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconМетодические рекомендации москва 2007 удк: 616. 12-005. 4-084-085. 273. 53. Ббк противотромбоцитарная терапия в клинической практике: Методические рекомендации. М. Гоувпо «мма им. И. М. Сеченова», М. Гоу впо «мгмсу росздрава», 2007

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconКурс 3 Время (продолжительность) 1 час Караганда 2011 г. Утверждена на заседании кафедры 26. 08. 2011г. Протокол №1 Зав кафедрой, д м. н., профессор

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconГ. И. Сторожаков член-корр. Рамн профессор проректор по учебной работе ргму зав кафедрой госпитальной терапии №2 лечебного факультета

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. С. Симаходскнй профессор, доктор медицинских наук, зав кафедрой поликлинической педиатрии спб гпма, на­чальник Управления лечебно-профилактической помощи ма­терям и детям Правительства Санкт-Петербурга

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconВ. П. Андреев заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский университет», кандидат медицинских наук, профессор
В. П. Андреев – заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconШалимов, В. В. Грубник, А. И. Ткаченко, О. В. Осипенко, С. Г. Четвериков инфекционный контроль в хирургии издание третье, дополненное и переработанное Киев 2001
Рецензенты: В. И. Мамчич, доктор медицинских наук, профессор, зав кафедрой хирургии Киевской медицинской академии последипломного...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconОтчет гоу впо «новосибирский государственный университет» по результатам реализации

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. В. Гришин зав кафедрой фармации Омгма, до

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU