Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава icon

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава





НазваниеЛ. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава
страница5/8
Л.Я. Плахтий
Дата конвертации22.07.2013
Размер1.7 Mb.
ТипДокументы
1   2   3   4   5   6   7   8

ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИЛ ПО ТЕМЕ

Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыхания.

Сущность дыхания у микрорганизмов — получение энергии, образующейся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или путем дегидрирования субстрата. Накопление энергии происходит в специальных структурах бактерий, называемых мезосомами.

В соответствии с потребностями в кислороде бактерии подразделяют на следующие основные группы:

1. Облигатные (строгие) аэробы- микроорганизмы, которые растут и размножаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae Pseudomonas aeriqinoza.

  1. Облигатные анаэробы — микроорганизмы, которые растут и размножаются только без доступа кислорода. Например: Clostridum botulinum, Clostridium te tani.

  2. Факультативные анаэробы — микроорганизмы, которые могут расти и размножатся как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях. Например: Escherichia coli, Salmonella typhi.

  3. Микроаэрофилы бактерии — микрорганизмы, которые лучше растут и размножаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании кислорода. Например: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.


Методы культивирования анаэробов

Способы создания анаэробных условий

а) механический — удаление (откачивание) воздуха из анаэростата с помощью вакуумного отсоса. Затем анаэростат заполняют газовой смесью, которая состоит из 80% азота, 10% водорода и 10% углекислого газа;

б) химический — поглощение кислорода за счет химических веществ (щелочной раствор пирогаллола, двууглекислая сода);

в) биологический (метод Фортнера) — совместное культивирование анаэробов и аэробов. При этом на одну чашку Петри с плотной питательной средой (чаще используют среду Цейсслера) засевают культуру анаэробов, на другую — культуру аэробов, способных энергично поглощать кислород. В качестве аэробов используют культуру чудесной палочки (Serratia marcescens). Края чашки Петри парафинируют;

г) физико-химический — посев исследуемого материала на специальные среды для анаэробов, например, среды Китта-Тароцци и Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар). Среды перед посевом регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 15минут) для удаления кислорода.

Состав среды Китта-Тароцци:

-кусочки печени — для адсорбции кислорода;

-1% глюкозы — для осуществления анаэробного гликолиза;

-полужидкий агар — не допускает кислород в толщу среды.


Получение чистой культуры анаэробов

1. Метод Вейнберга (методразведений)

Для получения изолированных колоний анаэробов из среды Китта-Тароцци с ростом анаэробных бактерий забирают культуру пастеровской пипеткой с запаянным концом и последовательно опускают эту пипетку вначале в 3 пробирки с физиологическим раствором, а затем — 3 пробирки с растопленным полужидким сахарным МПА. После термостатирования при 370С в последних наблюдается рост изолированных колоний анаэробов.


2. Метод Перетца.

Одно из последних разведений по Вейнбергу в полужидком агаре выливают в крышку чашки Петри и закрывают ее дном так, чтобы удалить воздух. Края чашки Петри парафинируют. Посев исследуемого материала на среду Цейсслера секторами с последующим культивированием в анаэростате.


ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕРКИ ЗНАНИЙ


Укажите все правильные ответы:

1. Для культивирования анаэробов без анаэростата используется среда:

а) Кровяной агар;

б) Желточно-солевой агар;

в) Эндо;

г) Китта-Тароцци;

д) Клауберга.


2. При анаэробном типе дыхании у бактерий отсутствует группа ферментов:

а) Дегидрогеназ;

б) Флавопротеинов;

в) Цитохромоксидаз;

г) Лецитиназ;

д) Нуклеаз.


3. Конечным акцептором электронов при аэробном типе дыхания у бактерий является:

а) Молекулярный кислород;

б) Неорганические соединения;

в) Органические соединения;

г) Одновременно органические и неорганические соединения;

д) Митохондриальные белки.


4. Конечным акцептором электронов при анаэробном типе дыхания у бактерий являются:

а) Молекулярный кислород;

б) Неорганические соединения;

в) Органические соединения;

г) Одновременно органические и неорганические соединения;

д) Митохондриальные белки.


5. Конечным акцептором электронов при брожении у бактерий являются:

а) Молекулярный кислород;

б) Неорганические соединения;

в) Органические соединения;

г) Органические и неорганические соединения вместе;

д) Митохондриальные белки.


6. Основное отличие условий культивирования анаэробов от аэробов:

а) добавление СО2 в питательную среду и окружающее пространство;

б) создание оптимальной температуры;

в) создание оптимальной рН среды;

г) добавление необходимых факторов роста;

д) удаление О2 из питательной среды и окружающего пространства.


7. Фотосинтетическое фосфорилирование характерно для:

а) для дрожжевых грибов;

б) анаэробных бактерий;

в) цианобактерий;

г) аэробных бактерий;

д) молочно-кислых бактерий.


8. Среда Китта-Тароцци служит для выделения:

а) облигатных аэробов;

б) облигатных анаэробов;

в) факультативных аэробов;

г) факультативных анаэробов;


9. Среда тиогликолевая служит для выделения:

а) облигатных аэробов;

б) облигатных анаэробов;

в) факультативных аэробов;

г) факультативных анаэробов;


10. Сахаролитические свойства микробов изучают на средах:

а) МПЛ, МПБ;

б) Гисса;

в) Ресселя;

г) кровяном агаре;

д) в тест-системе API;

е) в тест-системе Lachema.


11. Окислительное фосфорилирование характерно для:

а) облигатно-анаэробных бактерий;

б) факультативно-анаэробных бактерий;

в) облигатно-аэробных бактерий;


12. Биохимическая активность микробов на плотных средах Гисса учитывается по:

а) изменению цвета среды;

б) образованию осадка;

в) образованию газа;

г) разрыву среды.

13. Протеолитические ферменты микробов изучаются на средах:

а) с углеводами;

б) МПБ;

в) молоком;

г) желатиной.

УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №11


Т е м а: Антибиотики и химиотерапевтическая терапия


Учебная цель:

  1. Освоение методов бактериологического исследования.

  2. Определение чувствительности и спектра действия антибиотиков.


Студент должен знать:

1. Выполнение III и IY этапа исследования выделения чистой культуры аэробов и анаэробов.

2. Чувствительность методом индикаторных дисков.


Студент должен уметь:

  1. Определить биохимическую и протеолитическую активность выделенной чистой культуры.

  2. Описать характеристику чувствительности чистой культуры а антибиотикам.

  3. Запротоколировать


Контрольные вопросы по теме занятия

1. Антибиотики и химиотерапевтические препараты: получение, классификация, спектр действия. Механизмы антимикробного действия. Демонстрация антибиотиков с различным механизмом и спектром действия. Принципы рациональной антибиотико- и химиотерапии.

2. 3-4-й этапы выделения чистой культуры аэробов.

3. Выделения чистой культуры анаэробов (продолжение).

4. Дисбактериоз, эубиотики.

5. Определение чувствительности к антибиотикам методом индикаторных дисков.

6. Генетический контроль резистентности к антибиотикам у бактерий.


Самостоятельная работа студентов

  1. Учесть результаты дисковой антибиотикограммы.

  2. Демонстрация кассетного микрометода.

  3. Оформление протокола исследования.


Методические указания

Все антибиотики обладают избирательностью действия. Их относительная безвредность для человека определяется, прежде всего, тем, что они специфически подавляют такие метаболические процессы в микробной клетке или вируса, которые отсутствуют в эукариотной клетке или недоступны для них. В этом отношении уникальным является механизм действия бета-лактамных антибиотиков. Мишенями для них являются транспептидазы, которые завершают синтез пептидогликана клеточной стенки. Поскольку клеточная стенка есть только у прокариот, в эукариотной клетке нет мишени для бета-лактамных антибиотиков. Транспептидазы представляют собой набор белков-ферментов, локализованных в цитоплазматической мембране бактериальной клетки. Отдельные бета-лактамы различаются по степени сродства к тому или иному ферменту, которые получили название пеницил-линсвязывающих белков. Поэтому биологический эффект бета-лактамных антибиотиков различен: бактериостати-ческий, бактерицидный, литический.

Кроме бета-лактамных антибиотиков, синтез клеточной стенки поражают такие антибиотики, как бацитрацин, фосфомицин, циклосерин, ванкомицин, ристомицин, однако иным путем, чем пенициллин. Все они, кроме циклосерина, вызывают бактерицидный эффект.

Механизм действия таких антибиотиков, как хлорамфеникол, тетрациклины, стрептомицин, аминогликозиды, эритромицин, олеандромицин, спирамицин и другие макролиды, линкозамиды, фузидиевая кислота, связан с угнетением синтеза белка на уровне рибосом 708. Хотя бактериальные рибосомы 708 имеют такую же в принципе структуру, как рибосомы 808 эукариотных клеток, их белки и белковые факторы, участвующие в работе белоксинтезирующей системы, отличаются от таковых рибосом 808. Этим объясняется избирательность действия указанных антибиотиков на белковый синтез бактерий.

Разные антибиотики по-разному блокируют синтез белка. Тетрациклины блокируют связывание ат-РНК на А-участке рибосомы 708 . Хлорамфеникол подавляет пептидилтрансферазную реакцию. Стрептомицины препятствуют превращению инициаторного комплекса в функционально активную рибосому. Эритромицин блокирует реакцию транслокации. Пуромицин, присоединяясь к растущему концу синтезируемой полипептидной цепи, вызывает преждевременное отделение ее от рибосомы. Механизм действия фторхинолонов связан с их избирательным подавлением бактериальных ферментов ДНК-гираз, участвующих в репликации ДНК. Фторхинолоны связываются со специфическими участками ДНК, которые создаются воздействием ДНК-гиразы, и подавляют ее активность.

Рифампицины угнетают активность ДНК-зависимых РНК-полимераз, вследствие чего у бактерий подавляются процессы транскрипции.

Активность противоопухолевых антибиотиков связана с тем, что они либо являются ингибитором синтеза ДНК (брунеомицин), либо подавляют активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы, т. е. блокирует транскрипцию (антрациклины, актиномицины, оливомицин).

Учёт результатов определения чувствительности выделенных из исследуемого материала микроорганизмов к антибиотикам проводится следующим способом: на рабочем столе находится чашка Петри, на которой был высеян выделенный из исследуемого материала микроб и были нанесены на равном расстоянии друг от друга диски с антибиотиками (методика этой работы изложена в практическом руководстве).

Студенту необходимо сделать вывод о степени чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. Смысл данного исследования сводится к следующему: поверхность питательной среды на чашке смачивают взвесью выделенной чистой культуры в физ. растворе и таким образом достигается равномерное распределение культуры по всей чашке. «Поверх» посева накладываются диски с антибиотиками и чашки инкубируют в термостате. С дисков, пропитанных каждый отдельным антибиотиком, происходит диффузия антибиотиков в толщу агара. Чем чувствительнее культура к антибиотику, тем меньше его эффективность концентрации и тем больше диаметр зоны задержки роста культуры вокруг определенного диска. При этом результат учитывается по следующей схеме (таблица).


Культура

высокочувствительна

диаметр зоны угнетения роста бактерий 30 и более мм.

Культура

средне чувствительна

диаметр зоны угнетения роста бактерий не менее 20 мм.

Культура

слабо чувствительна

диаметр зоны угнетения роста бактерий не более 10 мм.


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕИАЛ ПО ТЕМЕ


Химический состав бактериальной клетки.

Вода составляет 75-80% массы микробной клетки и находится в свободном и связанном состоянии (коллоидно-связанная и ионно-связанная).

Функции свободной воды:

-является универсальным растворителем;

-обеспечивает оптимальные условия для переноса метаболитов;

-обеспечивает процессы осмоса и диффузии.

Связанная вода входит в состав молекул органических и неорганических соединений и является структурным элементом цитоплазмы бактерий.

Сухой остаток бактериальной клетки включает в себя неорганические и органические вещества. К неорганическим веществам относятся: углерод, азот, фосфор, калий, магний, сера, железо, медь, цинк, и другие которые участвуют в процессах метаболизма клетки. Некоторые неорганические вещества (железо, кальций) стимулируют рост большинства болезнетворных микробов.

Органические вещества представлены белками, углеводами, липидами и нуклеиновыми кислотами.

Белки составляют 50-80% сухого веса бактерий, входят в состав экзотоксинов, участвуют в транспорте питательных веществ, выполняют пластическую ферментативную функцию, определяют видовую специфичность бактерий.

Углеводы составляют 12-18% сухого веса клетки, качественно многообразны и представлены моносахаридами, дисахаридами, полисахаридами и многоатомными спиртами. Основная масса углеводов представлена полисахаридами. Функции углеводов: обеспечивают энергетику клетки, входят в состав эндотоксинов и некоторых структур компонентов бактериальной клетки.

Липиды их количество варьирует в широких пределах (0,1-1,4%) в зависимости от видовой и родовой принадлежности бактерий. Также как и углеводы, липиды качественно многообразны и представлены фосфолипидами, нейтральными жирами, свободными жирными кислотами. Преобладают в бактериальной клетке фосфолипиды. Основные функции липидов: определяют устойчивость бактерий во внешней среде, обеспечивают энергетику клетки при недостатке углеводов, входят в состав эндотоксинов, обладают пирогенными свойствами (повышение температуры тела макроорганизма при инфекционном заболевании)

Нуклеиновые кислоты (5-20%) представлены ДНК и РНК, структура и функции которых сходны с нуклеиновыми кислотами у эукариот. Процентное содержание Г + Ц в ДНК, характерное для отдельных видов, родов и семейств, используется в построении систематики микроорганизмов.

IV этап исследования. Учет биохимических свойств при температуре 37° С на 24 часа.


глюкоза

лактоза

маннит

сахароза

мальтоза

индол

сероводород

К/Г

К/Г

К/Г

-

К/Г

+

-

  • к — кислота

  • г — газ


ВЫВОД: из смеси бактерий выделены две культуры: первая культура идентифицирована как E coli на основании морфо-тинкториальных свойств (грамотрицатель-ные палолчки), культуральных (полупрозрачные, гладкие колонии средних размеров) и биохимических (ферментация углеводов, кроме сахарозы, до кислоты и газа и образование индола). Вторая культура идентифицирована как Staphelococcus на основании морфо-тинкториальных (грамположительных гроздьевидно-расположенные кокки) и культуральных (гладкие выпуклые колонии золотистого цвета) свойств.

УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №12


Т е м а: Культивирование вирусов, риккетсий и хламидий


Учебная цель:

  1. Изучить основные свойства вирусов и ознакомиться с методами вирусологических исследований.

  2. Изучить свойства риккетсий и хламидий и ознакомится с методами их культивирования.


Студент должен знать:

  1. Получение и классификацию клеточных культур.

  2. Строение и методы заражения куриного эмбриона.

  3. Требования к лабораторным животным, и способы их заражения.

  1. Цветную проба Солка.

  2. Реакции гемагглютинации и гемадсорбции.


Студент должен уметь:

1.Проводить взятие материала для вирусологического исследования.

2.Проводить заражение биологических моделей для культивирования вирусов с последующей индикацией.


Контрольные вопросы по теме занятия:

  1. Культивирование риккетсий, хламидий, вирусов.

  2. Строение куриного эмбриона.

  3. Классификация клеточных культур.

  4. . Способы заражения лабораторных животных, куриного эмбриона.

  5. . Изменения, происходящие в организме зараженных животных, куриного эмбриона, тканевых культурах (ци-топатическое действие).


Самостоятельная работа студентов

1. Дать правильные ответы на тестовые задания.

2. Зарисовать таблицы и демонстрационный материал.


Практическая работа:

Изучить демонстрационный материал:

  • Методы культивирования вирусов (вирусологический метод) на куриных эмбрионах. Зарисовать схему заражения куриного эмбриона (таблицы и слайды).

  • Методы культивирования вирусов (вирусологический метод) на культуре ткани. Зарисовать.

  • Цитопатическое действие вирусов на культуре клеток. Зарисовать (таблицы и слайды).

  • Реакции гемагглютинации и гемадсорбции для выявления вирусов.


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ

Риккетсии и хламидии являются облигатными внутриклеточными паразитами. В отличие от вирусов размножаются простым делением и содержат оба типа нуклеиновой кислоты (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. По типу дыхания риккетсии относятся к аэробам, но в отличие от последних, активно окисляют глютаминовую кислоту и индифферентны к глюкозе. Наличие у риккетсий высокопроницаемой оболочки позволяет им получать из клеток, в которых они размножаются, необходимые ферменты и метаболиты.

Хламидии являются энергетическими паразитами клетки-хозяина, так как у них отсутствуют собственные энергодающие ферментные системы. Вследствие этого искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые, метаболизирующие клетки.

Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются тканевые культуры, куриные эмбрионы и восприимчивые лабораторные животные.

Вирусы выделены в отдельное «царство»-Угга. Они содержат только один тип нуклеиновой кислоты, не имеют клеточной структуры, не имеют самостоятельного обмена веществ, являясь внутриклеточными паразитами, репродукция вирусов осуществляется разобщенным способом.

По международной классификации все вирусы подразделяются по типу нуклеиновой кислоты на 2 подтипа - РНК- и ДНК-содержащие. Дальнейшее разделение вирусов проводится на основании размеров вирусов, типа симметрии при формировании капсидов, наличия или отсутствия внешних оболочек и количества содержащихся в них капсомеров.


ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ является основным и наиболее достоверным, позволяет выделить вирус из исследуемого материала с последующей его идентификацией. С целью накопления вируссо-держащего материала используются куриные эмбрионы и культуры тканей (искусственно культивируемые клетки той или иной ткани). Культуры тканей поддерживаются на естественных (среда 27, Эндерса) и синтетических (среда 199, Игла, Мельника-Риордана) питательных средах, приготовленных на основе растворов Хенкса и Эрла. Культивируются они в обычных пробирках, чашках Карреля, пробирках Барского.


Методика заражения куриного эмбриона

Существует несколько способов заражения куриного эмбриона. Чаще всего материал вводят в аллантоисную и амниотическую полости, на хорионаллантоисную оболочку и в желточный мешок. Перед заражением скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают на пламени, смазывают 2% йодной настойкой, вторично протирают спиртом и обжигают.

При заражении в аллантоисную полость в скорлупе над воздушной камерой (границы которой заранее обводят карандашом при просвечивании яйца в овоскопе) проделывают небольшое отверстие с помощью ножниц или скальпеля. Туберкулиновым шприцем вводят 0,1-0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2-3 мм ниже границы воздушной камеры. Прокол в скорлупе заливают расплавленным парафином. Вскрытие зараженных эмбрионов производят в сроки максимального накопления вируса (через 48-72 ч инкубации при температуре 37 С) после обработки скорлупы спиртом и 2% р-ром йода ее рассекают и сбрасывают, снимают осторожно подскорлупную оболочку и рассматривают хорионаллантоисную оболочку вокруг места заражения на наличие очагов поражений (геморрагий, белесоватых очагов поражений).

Классификация клеточных культур:

первичные получают непосредственно из тканей животного и человека путем разрушения протеолитическими ферментами (трипсин, коллагеназа, проназа) межклеточного вещества. Разобщенные клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя монослой - слой толщиной в одну клетку. С помощью специальных реактивов клетки можно снять с поверхности одного сосуда и пересадить в другой. Такая манипуляция называется пассажем. Первичные культуры выдерживают не более 5-10 пассажей.

  • перевиваемые (пассажные) клеточные культуры способны выдерживать неограниченное количество пассажей. Они происходят из опухолевых клеток, утративших диференцнацию и не имеющих ограничений роста.

  • полуперевиваемые (диплоидные) культуры - фибробластоподобные клетки, которые способны к быстрому размножению, выдерживают до 30-60 пассажей и сохраняют исходный набор хромосом.

Вирусы могут репродуцироваться только в клетках живого организма. В связи с этим вирусы культивируются путем заражения куриных эмбрионов или культур тканей, а также животных-сосунков.


Выявление (индикация) вирусов

Обнаружение вируса в курином эмбрионе

  1. Гибель

  2. Появление запаха при вскрытии

  3. Помутнение жидкости в полости

  4. Образование язвочек и кровоизлияний на оболочках

Биологический метод исследования заключается в заражении чувствительного к вирусу животного исследуемым материалом, изучении клинической и патологоанатомической картины заболевания. В рамках этого метода используются различные животные: обезьяны, кролики, морские свинки, собаки, мыши, крысы. Способы заражения: субдуральный, внутримозговой, интраназальный и другие.

Способы обнаружения вируса в организме лабораторных животных различаются в зависимости от вида животного и типа вируса.


Обнаружение вирусов в культуре клеток

Выявление по цитопатическому действию (ЦПД). ЦПД представляет собой дегенеративные изменения в клетках, которые появляются в результате репродукции в них вирусов.

Различают полную и частичную дегенерацию клеток монослоя.

При полной дегенерации, вызываемой, например вирусами полиомиелита, Коксаки и ЕСНО, клетки монослоя подвергаются значительным изменениям, большее их количество слущивается со стекла. Оставшиеся единичные клетки сморщены.

Частичная дегенерация имеет несколько разновидностей:

  1. По типу гроздьеобразования (аденовирусы);

  2. По типу очаговой деструкции (оспа, грипп);

3 По типу симпластообразования (корь, паротит, парагрипп, герпес, ВИЧ)

Пролиферативный тип изменений характерен для некоторых онкогенных вирусов, трансформирующих клетки в злокачественные

Внутриклеточные включения образуются при репродукции некоторых вирусов в цитоплазме и ядре клеток (оспы,

бешенства, гриппа, герпеса и др.) Их обнаруживают при микроскопии после окраски монослоя по Романовскому - Гимзе, а также при люминесцентной микроскопии.

Цветная проба Солка. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате этого цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток такими цитопатогенными вирусами, как энтеровирусы или реовирусы, метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не меняются (среда остается красной).

Реакция гемагглютинации. В основе этой реакции лежит способность вирусов, содержащих рецепторы-гемагглютинины, «склеивать» эритроциты. Если есть гемаглютинины - РГА+(зонтик), если нет - РГА - (пуговка).

Реакция гемадсорбции. Механизм сходен с РГА.


ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

1. Для микробиологической диагностики вирусных инфекций применяют следующие основных методических подхода

  1. Бактериологическая диагностика Б) Вирусологическая диагностика

  2. Серологическая диагностика

Г) Молекулярно-биологическая диагностика


2. Вирусы размножаются только:

A) В живых системах

Б) На мясопептонном агаре

B) На дифференциально-диагностических средах.
Г) На элективных средах


3. Первым этапом вирусологической диагностики является получение и подготовка

A) Культур клеток

Б) Куриных эмбрионов

B) Чувствительных лабораторных животных

Г) Дифференциально-диагностических сред


4. Первичные культуры выдерживают

A) Не более 5-10 пассажей

Б) Неограниченное число пассажей

B) До 30-60 пассажей


5. Перевиваемые культуры выдерживают

A) Не более 5-10 пассажей

Б) Неограниченное число пассажей

B) До 30-60 пассажей


6. Полуперевиваемые (диплоидные) культуры выдерживают

A) Не более 5-10 пассажей

Б) Неограниченное число пассажей

B) До 30-60 пассажей


7. Выявляют вирусы

  1. По цитопатическому действию Б) По образованию бляшек

  2. По цветной пробе

Г) По биохимическим свойствам


8. Обнаруживают вирус в куриных эмбрионах

  1. По изменению хорионаллантоисной оболочки Б) РГА (Реакция агглютинации)

  2. РСК (Реакция связывания комплемента) Г) РП (Реакция преципитации)


9. Для выделения риккетсии заражают:

  1. Хорионаллантоисную оболочку Б) аллантоисную полость

  2. амниотическую полость Г) Желточный мешок


10. Экспериментальные животные в вирусологии применяются для:

A) Диагностики вирусных инфекций

Б) Получение иммунных противовирусных сывороток и ингредиентов крови

B) Разработки способов специфической и неспецифической профилактики

Г) Моделирования вирусных инфекций для изучения патогенеза, иммунитета, патоморфологии.

УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №13


Т е м а: Симбиоз и антагонизм в мире микробов


ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ:

«Физиология и культивирование микроорганизмов. Антибиотики»


Учебная цель:

1. Освоить закономерности синергизма и антагонизма в мире микробов.


Исходный уровень знаний:

1. Физиология микроорганизмов.


Студент должен знать:

  1. Этапы и факторы симбиоза человека с микробами.

  2. Микрофлору воздуха, воды, почвы, тела человека.




  1. Условия формирования ассоциации резидентов.

  2. Отличия патогенов от резидентов.


Студент должен уметь:

  1. Проводить посев материала с пальцев рук на чашку с МПА (метод отпечатков).

  2. Проводить посев воздуха на чашку с МПА.

  3. Посев отделяемого из носа и зева на МПА.


Контрольные вопросы по теме занятия

  1. Этапы и факторы симбиоза человека с микробами.

  2. Условия формирования ассоциации резидентов.

  3. Как происходит регуляция резидентной микрофлоры?

  4. Отличия патогенов от резидентов.

  5. Какими методами можно изучать микрофлору человека?

  6. Состав резидентной микрофлоры кожных покровов человека.


Самостоятельная работа студентов

  1. Приготовить мазок из зубного налета, окрасить его по Граму, изучить под микроскопом.

  2. Микроскопически изучить некоторых представителей резидентов полости рта человека:

а) мазок из чистой культуры лактобактерий;

б) мазок из чистой культуры актиномицетов;

в) мазок из чистой культуры гриба кандида.

3. Посев материала с пальцев рук на чашку с МПА (метод отпечатков).

4. Посев воздуха на чашку с МПА.

  1. Посев культуры на МПА для определения чувствительности к антибиотикам.

  2. Провести подсчет количества колоний микробов, выросших в отпечатках кожи пальцев рук (отпечаток пальца немытого, вымытого с мылом и обработанного спиртом).

  1. Провести макроскопическое изучение колоний, выросших в отпечатках кожи пальцев рук.

  2. Произвести микроскопическое изучение колоний, выросших в отпечатках кожи пальцев рук.

  3. Произвести макро- и микроскопическое изучение колоний, выделенных из воздуха.

  4. Оформление протокола.

  5. Дать правильные ответы на тестовые задания.


Практическая работа

1. Мазок из зубного налета готовят на предметном стекле. На стекло наносят каплю воды. Забор исследуемого материала производят бактериальной петлёй, предварительно её простерилизовав. Взятый материал из межзубных промежутков или у шейки зуба наносят на предметное стекло рядом с каплей воды и растирают его посуху, а затем вносят петлей воду, постепенно готовя однородную взвесь и равномерно распределяя её по поверхности стекла.

Мазок высушивают на воздухе, фиксируют на пламени горелки и окрашивают по Граму.

При микроскопии препарата в поле зрения можно увидеть крупные толстые палочки, располагающиеся одиночно или в виде цепочек, длинные нитевидные бактерии, кокки, расположенные одиночно, попарно, цепочками, извитые формы, а также эпителиальные клетки и лейкоциты.

  1. Демонстрационные мазки микроскопировать и зарисовать.

  2. На чашке с МПА проводят посевы с пальцев рук. Для этого осторожно, стараясь не повредить агар, прижимают палец к поверхности агара. Сначала делается посев с немытого пальца, затем с вымытого с мылом, затем с обработанного спиртом. Чашки оставляют в термостате на 24 часа.

  3. Посев воздуха проводят в аудитории, оставив чашку с МПА открытой на 10 мин.

  4. Посев культуры на агар ЛГВ (МПА) для определения чувствительности к антибиотикам проводят следующим образом. Готовят смыв суточной культуры (стафилококка) в физиологическом растворе. Стерильной пастеровской пипеткой наносят его на поверхность агаровой среды в чашке Петри, оставляя на 3-5 мин для осаждения микробных клеток. Получают посев «сплошным газоном». Затем избыток жидкости сливают в стакан с дез. раствором. На влажную поверхность с помощью пинцета наносят стандартные диски с антибиотиками. Инкубация в термостате 24 часа при 37 градусах.


1   2   3   4   5   6   7   8

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconМетодические рекомендации москва 2007 удк: 616. 12-005. 4-084-085. 273. 53. Ббк противотромбоцитарная терапия в клинической практике: Методические рекомендации. М. Гоувпо «мма им. И. М. Сеченова», М. Гоу впо «мгмсу росздрава», 2007

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconКурс 3 Время (продолжительность) 1 час Караганда 2011 г. Утверждена на заседании кафедры 26. 08. 2011г. Протокол №1 Зав кафедрой, д м. н., профессор

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconГ. И. Сторожаков член-корр. Рамн профессор проректор по учебной работе ргму зав кафедрой госпитальной терапии №2 лечебного факультета

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. С. Симаходскнй профессор, доктор медицинских наук, зав кафедрой поликлинической педиатрии спб гпма, на­чальник Управления лечебно-профилактической помощи ма­терям и детям Правительства Санкт-Петербурга

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconВ. П. Андреев заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский университет», кандидат медицинских наук, профессор
В. П. Андреев – заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconШалимов, В. В. Грубник, А. И. Ткаченко, О. В. Осипенко, С. Г. Четвериков инфекционный контроль в хирургии издание третье, дополненное и переработанное Киев 2001
Рецензенты: В. И. Мамчич, доктор медицинских наук, профессор, зав кафедрой хирургии Киевской медицинской академии последипломного...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconОтчет гоу впо «новосибирский государственный университет» по результатам реализации

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. В. Гришин зав кафедрой фармации Омгма, до

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU