Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава icon

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава





НазваниеЛ. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава
страница3/8
Л.Я. Плахтий
Дата конвертации22.07.2013
Размер1.7 Mb.
ТипДокументы
1   2   3   4   5   6   7   8

Вопросы, рассматриваемые на занятии:

  1. Носители генетической информации у микроорганизмов.

  2. Формы проявления изменчивости микроорганизмов. Модификации. Мутации, их классификация. R-S диссоциации. Практическое значение изменчивости микроорганизмов.

  3. Мутагены, классификация, механизм действия мутагенов на геном микроорганизмов.

  4. Роль цитоплазматических генетических структур в изменчивости микроорганизмов.

  5. Генетические рекомбинации.

  6. Трансформация, стадии процесса трансформации.

  7. Трансдукция, специфическая и неспецифическая трансдукция.

  8. Конъюгация, стадии процесса конъюгации.


Самостоятельная работа студентов:

1. Указать правильные ответы в тестовых заданиях.


Практическая работа студентов:

1. Просмотр и зарисовка демонстрационных препаратов:

а) R-S диссоциация бактерий.


Контрольные вопросы:

  1. Что является материальной основой наследственности микроорганизмов?

  2. Какие существуют формы проявления изменчивости микроорганизмов?

  1. Каково практическое значение изменчивости микроорганизмов?

  2. Что такое модификации?

  3. Что такое мутации?

  4. Какая существует классификация мутаций?

  5. Что такое мутагены?

  6. Каков механизм действия мутагенов на геном микроорганизмов?

  1. Какова роль цитоплазматических генетических структур в изменчивости микроорганизмов?

  2. Что такое генетические рекомбинации?

  3. Что такое трансформация? Какие стадии выделяют в этом процессе?

  4. Что такое трансдукция?

  5. Что такое конъюгация? Какие стадии выделяют в этом процессе?


ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ


Указать правильные ответы:

1. Что относят к внехромосомным генетическим структурам?

а) рибосомы

б) полисомы

в) плазмиды

г) мезосомы

д) транспозоны


2. Что такое мутагены?

а) гены, обеспечивающие мутацию

б) факторы, вызывающие мутацию

в) факторы, передающие генетическую информацию

г) факторы, восстанавливающие ДНК

3. Что такое экзон?

а) вирулентный бактериофаг

б) профаг

в) участок гена, несущий определенную генетическую информацию

г) умеренный бактериофаг


4. Что такое инверсия?

а) способ генетической рекомбинации

б) исправление поврежденных участков ДНК

в) хромосомная мутация

г) точковая мутация


5. Что такое модификация?

а) исправление поврежденных участков ДНК

б) фенотипические изменения, не затрагивающие генома клетки

в) передача генетического материала при помощи бактериофага

г) наследственное скачкообразное изменение признака


6. Для конъюгации характерно:

а) передача генетического материала при помощи бактериофага

б) необходим контакт клеток донора и реципиента

в) передача генетического материала с помощью РНК

г) передача генетического материала с помощью полового фактора


7. Что такое репарация?

а) лизогения

б) восстановление поврежденной ДНК

в) способ передачи генетической информации

г) виропексис


8. Чем характеризуется «минус» цепь РНК?

а) обладает инфекционной активностью

б) несет наследственную функцию

в) способна встраиваться в хромосому клетки

г) не обладает функцией информационной РНК


9. У каких микроорганизмов материальной основой наследственности является РНК?

а) у бактерий

б) у спирохет

в) у РНК-содержащих вирусов

г) у ДНК-содержащих вирусов

д) у микоплазм


10. Что такое мутации?

а) исправление поврежденных участков ДНК

б) передача генетического материала при помощи бактериофага

в) наследственное скачкообразное изменение признака

г) процесс образования бактериального потомства, содержащего признаки донора и реципиента


11. Что такое трансформация?

а) восстановление поврежденной ДНК

б) передача генетической информации при контакте бактериальных клеток разной «половой» направленности

в) передача генетической информации с помощью фрагмента ДНК

г) передача генетической информации от клетки донора клетке реципиента с помощью бактериофага


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ


Постановка опыта трансформации

Реципиент — штамм Bacillus subtilis Str (сенная палочка, чувствительная к стрептомицину); донор — ДНК, выделенная из штамма В. Subtilis Str (устойчивого к стрептомицину). Селективная среда для отбора рекомби-нантов (трансформантов) питательный агар, содержащий 100 ЕД/мл стрептомицина.

К 1 мл бульонной культуры В. Subtilis добавляют 1 мкг/мл раствора ДНКазы в 0,5 мл раствора хлорида магния для разрушения ДНК, не проникшей в бактериальные клетки реципиентного штамма, и выдерживают в течение 5 мин. Для определения количества образовавшихся стрептомицинустойчивых рекомбинантов (трансформантов) 0,1 мл неразведенной смеси высевают на селективную среду в чашку Петри. Для определения количества клеток реципиентной культуры в изотоническом растворе хлорида натрия готовят 10-кратные разведения до 10-5-10-6 (для получения сосчитываемого количества колоний), высевают по 0,1 мл на питательный агар без стрептомицина, а для контроля — на агар со стрептомицином. На последней среде реципиентная культура не должна расти, поскольку она чувствительна к стрептомицину. Посев инкубируют, при 370 С. На следующий день учитывают результаты опыта и определяют частоту трансформации по отношению количества выросших рекомбинантных клеток к числу клеток реципиентного штамма.

Допустим, что при высеве 0,1 мл культуры реципи-ентного штамма в разведении 10-5 выросло 170 колоний, а при высеве 0,1 мл неразведенной смеси — 68 колоний рекомбинантного штамма. Поскольку каждая колония образовалась в результате размножений только одной бактериальной клеткой, то в 0,1 мл засеянной культуры реципиента содержится 170 х 105 жизнеспособных клеток, а в 1 мл — 170 х 106, или 1,7 х 108. В то же время в 0,1 мл смеси находится 68 рекомбинантных клеток, а в 1 мл — 680, или 6,8 х 102.

Таким образом, частота трансформации в данном опыте будет равна:





Постановка опыта специфической трансдукции

Реципиент — штамм Е. coli lac-, лишенный 3-галактозидазного оперона, контролирующего ферментацию лактозы. Трансдуцирующий фаг — фаг X dgal, в геноме которого часть генов замещена (3-галактозидазным опе-роном Е. coli. Он является дефектным, т. е. не способен вызывать продуктивную инфекцию, заканчивающуюся лизисом кишечной палочки, и обозначается буквой d (фаг dgal) с названием содержащегося в геноме бактериального оперона gal. Селективная среда — среда Эндо, на которой лактозоотрицательные бактерии реципиентного штамма образуют бесцветные колонии, а лактозоположительные колонии рекомбинантного штамма приобретают красный цвет с металлическим оттенком. К 1 мл 3-часовой бульонной культуры реципиентного штамма добавляют 1 мл трансдуцирующего фага dgal в концентрации 106- 107 частиц в 1 мл. Смесь инкубируют в течение 60 мин при 370С, после чего готовят ряд 10-кратных разведений (в зависимости от предполагаемой концентрации бактерий) для получения сосчитываемого количества колоний. Из пробирки с разведением 10-6 делают высев по 0,1 мл культуры на 3 чашки Петри со средой Эндо и равномерно распределяют жидкость шпателем по поверхности среды.

Посевы инкубируют в течение 1 суток, после чего отмечают результаты опыта и вычисляют частоту трансдукции по отношению количества клеток рекомбинантов (транс-дуктантов), обнаруженных на всех чашках, к числу клеток реципиентного штамма.

Например, после посева 0,1 мл смешанной культуры в разведении 10-6 на 3 чашках со средой Эндо выросло соответственно 138, 170 и 160 бесцветных колоний реципиентного штамма, на первой и последней чашках — 5 и 1 колонии трансдуктантов красного цвета. Следовательно, частота трансдукции в этом случае будет равна:





Постановка опыта конъюгации с целью передачи фрагмента хромосомы, который содержит ген leu, контролирующий синтез лейцина.

Донор — штамм Е. coli K12 Hfr leu StrS; реципиент — штамм Е. Coli K12 F- leu+ StrR . Hfr — обозначение состояния, для которого характерна высокая частота рекомбинации. Селективная среда для выделения рекомбинантов -минимальная глюкозосолевая среда: КН2РО4 — 6,5 г, MgSO4 — 0,1 г, (NH4)2SO4 — 1 г, Ca(NO3)2 — 0,001 г, FeSO4 — 0,0005 г, глюкозы — 2 г, стрептомицина — 200 ЕД/мл, дистиллированной воды — 1 л.

К 2 мл 3-часовой культуры реципиента добавляют 1 мл бульонной культуры донора. Посевы инкубируют при 370 С в течение 30 мин. Затем смесь разводят до 10-2-103 и высевают по 0,1 мл на селективную агаровую среду в чашки Петри, на которой вырастут только колонии рекомбинантов. В качестве контроля на ту же среду высевают донорский и реципиентный штаммы, которые не будут расти на ней, т. к. первый штамм чувствителен к стрептомицину, а второй ауксотрофен по лейцину. Кроме того, культуру донорского штамма высевают на селективную среду без стрептомицина, а культуру реципиентного штамма — на полную среду (питательный агар) с антибиотиками для определения числа жизнеспособных клеток. Посевы инкубируют при 370 С до следующего дня. После подсчета числа выросших колоний определяют частоту рекомбинаций по отношению количества рекомбинантных клеток к реципиентным.

Например, после посева 0,1 мл смеси донорских и реципиентных культур в разведении 10-2 выросло 150 колоний рекомбинантов, а после посева 0,1 мл культуры реципиента из разведения 10-6 75 колоний. Таким образом, частота рекомбинации будет равна:





УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА №7


Т е м а: Бактериологический метод диагностики

инфекционных заболеваний. Питание бактерий. Принципы культивирования микроорганизмов. Питательные среды. Методы стерилизации


Учебная цель: Освоить бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Изучить типы питания бактерий, принципы культивирования микроорганизмов, классификацию питательных сред и методы стерилизации.


Необходимый исходный уровень знаний: Физиология микроорганизмов.


Практические знания и умения, которые должен получить студент на занятии:


Знать

Уметь

1. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний, его цель и этапы

1. Приготовить питательные среды

2. Типы питания бактерий

2. Оценить эффективность стерилизации и дезинфекции

3. Принципы культивирования микроорганизмов




4. Питательные среды, требования, предъявляемые к питательным средам




5. Классификация питательных сред, состав и приготовление




6. Методы стерилизации




7. Механизм действия стерилизующих факторов на молекулярную структуру микроорганизмов




8. Отличия понятий контаминации и деконтаминации, дезинфекции и стерилизации, асептики и антисептики




9. Классификация инструментов, приборов, способов обработки и видов воздействия




10. Современные технологии стерилизации и аппаратура




11. Способы контроля эффективности стерилизации и дезинфекции





Вопросы, рассматриваемые на занятии:

  1. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний, его цель и этапы.

  2. Типы питания бактерий.

  3. Принципы культивирования микроорганизмов.

  1. Питательные среды; требования, предъявляемые к питательным средам.

  2. Классификация питательных сред, их состав и приготовление.

  3. Методы стерилизации: физические, химические, биологические и механические.

  4. Микроб как объект стерилизации и дезинфекции. Связь со строением микробной клетки. Основные мишени молекулярной структуры микроорганизмов при стерилизующих и дезинфицирующих воздействиях.

  5. Отличия понятий контаминации и деконтаминации, дезинфекции и стерилизации, асептики и антисептики.

  6. Классификация инструментов, приборов, способов обработки и видов воздействия для стерилизации и дезинфекции.

  1. Современные технологии стерилизации и аппаратура.

  2. Способы контроля эффективности стерилизации и дезинфекции.


Самостоятельная работа студентов:

1. Опыт по определению действия высокой температуры (80°С) на спорообразующие (антракоид) и аспорогенные (кишечная палочка и стафилококк) микроорганизмы.

Преподаватель разъясняет опыт:

а) на каждый стол даётся взвесь стафилококка, кишечной палочки и споровой палочки (антракоида);

б) делается посев каждой взвеси на косой агар до прогревания;

в) исследуемые взвеси помещаются на водяную баню при температуре 800С на 20 минут;

г) делается посев каждой взвеси на косой агар после прогревания;

д) заполняется протокол по форме:


Учет роста культуры

Стафилококк

Кишечная палочка

Антракоид

до прогревания










после прогревания











Вегетативные формы патогенных микроорганизмов погибают при 50-600С в течении 30 минут, а при температуре 700 С в течении 5-10 минут. Споры бактерий обладают большей устойчивостью к высоким температурам, что объясняется содержанием в них воды в связанном состоянии, большим содержанием солей кальция, липидов и плотностью, многослойностью оболочки. Следовательно, стафилококк и кишечная палочка после прогревания погибают, а споры антракоида выживают. Это и надо учитывать в оценке результатов посева.

2. Заполнить самостоятельно таблицу:




Способ стерилизации

Аппарат

Надёжность

Стерилизуемый материал

1.

Стерилизация

в пламени










2.

Плазменная

Стерилизация










3.

Сухой жар










4.

Паром под давлением










5.

Текучим паром










6.

Тиндализация










7.

Фильтрование










8.

Физические факторы (УФЛ, гамма-лучи, ультразвук)










9.

Газовая стерилизация










10.

Пастеризация











3. Указать правильные ответы в тестовых заданиях.


Практическая работа студентов:

1. Просмотр демонстрационных препаратов и приборов:

а) питательных сред (МПБ, МПА, кровяной агар, сывороточный агар, среды Гисса, среда Эндо, среда Плоскирева);

б) печи Пастера, автоклава.


Контрольные вопросы:

  1. Какие цели и этапы бактериологического метода диагностики инфекционных заболеваний?

  2. Что такое питание бактерий?

  3. Какие существуют типы питания бактерий?

  4. Каковы принципы культивирования микроорганизмов?

  5. Что такое питательные среды?

  6. Какие требования предъявляются к питательным средам?

  7. Какая существует классификация питательных сред?

  8. Как готовятся питательные среды?

  9. Что такое стерилизация?

  10. Какие существуют методы стерилизации?

  11. В чем разница между понятиями контаминация и деконтаминация, дезинфекция и стерилизация, асептика и антисептика?

  12. На какие клеточные структуры микроорганизмов действуют стерилизующие и дезинфицирующие факторы?

  13. Какая существует классификация инструментов, приборов, способов обработки и видов воздействия для стерилизации и дезинфекции?

  14. Какие известны современные технологии стерилизации и аппаратура?

  15. Какие используются способы контроля эффективности стерилизации и дезинфекции?


ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ


Укажите правильные ответы:

1. Какие питательные среды являются простыми?

а) среда Эндо

б) МПА

в) кровяной агар

г) МПБ

д) пептонная вода


2. Что такое стерилизация?

а) полное обеспложивание объектов от всех видов микробов и их спор

б) уничтожение патогенных микроорганизмов

в) уничтожение вегетативных форм микроорганизмов

г) предотвращение попадания микроорганизмов в рану

д) уничтожение на объектах конкретных видов микробов


3. Какие факторы используются при автоклавировании?

а) температура

б) фильтры

в) пар

г) давление


4. Какие факторы используются в печи Пастера?

а) давление

б) пар

в) сухой жар

г) антибиотики


5. Питательные среды по назначению делятся на:

а) простые

б) элективные

в) жидкие

г) дифференциально-диагностические

д) транспортные


6. По отношению к факторам роста микроорганизмы делятся на:

а) аутотрофы

б) гетеротрофы

в) ауксотрофы

г) литотрофы

д) прототрофы

е) органотрофы


7. Оптимальной температурой для выращивания большинства патогенных микроорганизмов является:

а) 20°С

б) 30°С

в) 37°С

г) 40°С


8. К физическим методам стерилизации относятся:

а) ультразвук

б) ультрафиолетовые лучи

в) антибиотики

г) фильтрование

д) паровая стерилизация

е) сухожаровая стерилизация


9. На рост бактерий влияют следующие условия культивирования:

а) содержание в питательной среде питательных веществ

б) рН среды

в) температура

г) влажность среды

д) факторы роста

е) все ответы неправильные


10. Плотность питательных сред зависит от содержания в них:

а) хлорида натрия

б) пептона

в) агар-агара

г) сахарозы

д) сыворотки крови


11. Микробы, использующие неорганические источники углерода и окислительно-восстановительные реакции для получения энергии, называются:

а) хемоорганотрофами

б) фотоорганотрофами

в) хемолитотрофами

г) хемоаутотрофами

д) хемоауксотрофами


12. Перечислите способы стерилизации, освобождающие объект от споровых форм микробов:

а) облучение ультрафиолетом

б) автоклавирование

в) пастеризация

г) сухим жаром

д) гамма-облучение


13. Расположите в правильной последовательности процессы обработки лабораторного инстументария:

а) предстерилизационная очисткастерилизация

б) предстерилизационная очисткастерилизациядезинфекция

в) предстерилизационная очисткадезинфекция-стерилизация

г) дезинфекцияпредстерилизационная очисткастерилизация


14. Комплекс мероприятий, направленных на уничтожение патогенных микроорганизмов, называется:

а) асептика

б) антисептика

в) дезинфекция

г) стерилизация

д) тиндализация


ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

Микробиологическое исследование проводится с целью выделения чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучения их свойств. Оно необходимо при диагностике инфекционных болезней, для определения видовой принадлежности микробов, в исследовательской работе, для получения продуктов жизнедеятельности микробов (токсинов, антибиотиков, вакцин и т. п.). Для выращивания микроорганизмов в искусственных условиях необходимы особые субстраты — питательные среды. Они являются основой микробиологической работы и определяют результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные условия для жизнедеятельности микробов.


ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЬЯВЛЯЕМЫЕ К СРЕДАМ:

  1. Должны быть питательными, т. е. содержать в легкоусвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей микроорганизмов.

  2. Иметь оптимальную концентрацию водородных ионов.

  3. Быть изотоничными для микробной клетки.

  4. Быть стерильными.

  5. Быть влажными.

  6. Обладать определённым окислительно-восстановительным потенциалом.

  7. Быть по возможности унифицированными.

Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования.


Группа

классификации

Класс

Примеры

По составу

Простые

Жидкие — МПБ, пептон-ная вода Плотные — МПА




Сложные

Жидкие — сахарный бульон Плотные — сахарный агар, кровяной агар

По происхождению

Естественные

Молоко, свёрнутая сыворотка, срез сырого картофеля




Искусственные

Молочно-солевой агар Сывороточный агар Асцит-агар Кровяной агар




Синтетические

Среда Игла, среда 199

По назначению

Селективные (элективные)

-для стафилококка:

-для грам(-) кокков и

дифтероидов:

-для энтеробактерий:

-для холерного вибриона:

-для лактобацилл и грибов

Молочно-солевой агар, жел-точно-солевой агар Сывороточные среды Среды с солями теллура Среды с солями желчных кислот

Пептонный бульон и щелочной агар

Томат-агар, рисовый агар, агар Сабуро

По консистенции



Дифференциально-диагностические

Универсальные

Среды обогащения

Консервирующие

Жидкие

Полужидкие

Плотные

Эндо, Плоскирева, Левина, Ресселя, Гисса

МПБ, МПА, кровяной агар

Среда Мюллера

Среды с глицерином

МПБ, пептонная вода, сахарный МПБ

МПЖеле, желатиновая

МПА, кровяной агар
1   2   3   4   5   6   7   8

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconЗав кафедрой профессор Сукало А. В

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconМетодические рекомендации москва 2007 удк: 616. 12-005. 4-084-085. 273. 53. Ббк противотромбоцитарная терапия в клинической практике: Методические рекомендации. М. Гоувпо «мма им. И. М. Сеченова», М. Гоу впо «мгмсу росздрава», 2007

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconКурс 3 Время (продолжительность) 1 час Караганда 2011 г. Утверждена на заседании кафедры 26. 08. 2011г. Протокол №1 Зав кафедрой, д м. н., профессор

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconГ. И. Сторожаков член-корр. Рамн профессор проректор по учебной работе ргму зав кафедрой госпитальной терапии №2 лечебного факультета

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. С. Симаходскнй профессор, доктор медицинских наук, зав кафедрой поликлинической педиатрии спб гпма, на­чальник Управления лечебно-профилактической помощи ма­терям и детям Правительства Санкт-Петербурга

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconВ. П. Андреев заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский университет», кандидат медицинских наук, профессор
В. П. Андреев – заведующий кафедрой медицинской биологии и общей генетики Учреждения образования «Гродненский государственный медицинский...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconШалимов, В. В. Грубник, А. И. Ткаченко, О. В. Осипенко, С. Г. Четвериков инфекционный контроль в хирургии издание третье, дополненное и переработанное Киев 2001
Рецензенты: В. И. Мамчич, доктор медицинских наук, профессор, зав кафедрой хирургии Киевской медицинской академии последипломного...

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconОтчет гоу впо «новосибирский государственный университет» по результатам реализации

Л. В. Бибаева д м. н., профессор, зав кафедрой биологии гоу впо согма росздрава iconА. В. Гришин зав кафедрой фармации Омгма, до

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU