Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией icon

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией





Скачать 305.01 Kb.
НазваниеФармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией
ГЛОТОВА СВЕТЛАНА ВЯЧЕСЛАВОВНА
Дата конвертации25.06.2013
Размер305.01 Kb.
ТипАвтореферат
На правах рукописи


ГЛОТОВА СВЕТЛАНА ВЯЧЕСЛАВОВНА


ФАРМАКО–ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГЕПАКАРДИНА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ГЕРИАТРИИ


06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук


Санкт-Петербург - 2010


Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».


Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Соколов Владимир Дмитриевич


Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Соколова Лидия Николаевна


доктор ветеринарных наук, профессор Рахматуллин Эмиль Касымович


Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки»


Защита диссертации состоится 15 апреля 2010 года в 1300 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5, тел./факс (812) 388-36-31.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».


Автореферат разослан 12 марта 2010 года и размещён на сайте http://spbgavm.ru 15 марта 2010 года.


Ученый секретарь диссертационного совета Белова

Лариса Михайловна



  1. Общая характеристика работы


Актуальность темы.

Продолжительное использование животных на фермах служит одним из главных показателей высокой культуры ведения хозяйства. При широко проводимой в настоящее время интенсификации животноводства продление срока использования животных - необходимое условие для дальнейшего экономически эффективного развития данной отрасли (Бычков А.И., 1995; Сивольский А.В., 2002).

Аналогичная тенденция прослеживается и среди домашних плотоядных животных.

Отмечено (Laflamme DP.,2005; Kraft W., 1997), что в последние годы за ветеринарной помощью стали чаще обращаться владельцы с пациентами средней и старшей возрастных групп. Это связано с увеличением средней продолжительности жизни и повышением абсолютной численности животных старшей возрастной группы.

Соответственно, практикующим ветеринарным специалистам все чаще и чаще приходится сталкиваться с заболеваниями, характерными для стареющих животных (Соколов В.Д., 2008; Чуваев И.В., 2007).

Как показывает анализ работы клинических подразделений, инфекционные заболевания отступили на второй план и большей частью встречаются болезни неинфекционной этиологии (Дейвис М., 2002).

В настоящее время (Чуваев И.В., 2009; Witte P., Scott H., 2009) наиболее часто встречаются болезни, связанные с нарушением обмена веществ (мочекаменная болезнь, артриты, артрозы, остеохондрозы и пр.), иммунной системы (онкология, аутоиммунные заболевания, аллергические проявления и т.д.) и поражением печени (гепатит, цирроз и пр.).

Доказано, что у животных с возрастом наблюдается усиление интенсивности процессов перекисного окисления липидов, снижается антиоксидантная защита организма (Бахта А.А., 2008; Мельниченко В.И. 2006). Это является важным этиологическим фактором возникновения ряда хронических болезней, а также приводит к появлению новообразований у старых животных и в целом к появлению большинства признаков старения (Анисимов В.Н., 2003; Holzenberger M., Dupond J., Ducos B., 2003; Orr W.C., Sohal R.S., 1994).

На сегодняшний день для лечения заболеваний, возникающих в этот период онтогенезе, используется широкий спектр монопрепаратов (кардио-, гепато-, хондропротекторы, антиоксиданты и др.). Это в значительной степени отражается на стоимости и трудоемкости применения препаратов животным, т.к., как правило, используется не один, а несколько лекарственных средств одновременно.

Данные факты свидетельствуют об актуальности и необходимости поиска комплексных лекарственных средств для увеличения продолжительности и улучшения качества жизни старых животных.

Все это и послужило обоснованием к разработке гериатрического направления в ветеринарной фармакологии.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в разработке эффективного политропного гериатрического средства, обладающего кардио-, гепато -, хондропротекторными, антиоксидантными свойствами и способного улучшать качество жизни старых животных.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- разработать рецептуру препарата;

- определить лечебно-профилактическую дозу препарата для собак;

- определить в лабораторных условиях безвредность (токсичность) препарата;

- изучить гепатопротекторное, противотоксичное и кардиопротекторное свойства препарата на лабораторных животных;

- испытать препарат на животных старшей возрастной группы.

Научная новизна. Разработан новый политропный гериатрический препарат для животных и впервые изучены его фармако-токсикологические свойства. Установлено, что препарат Гепакардин (ЧИН 3607) обладает выраженным гепато-, кардио– , хондропротекторными и антиоксидантными свойствами. Показана его лечебная эффективность и безвредность для организма лабораторных и плотоядных животных, что дает основание для применения данного средства в ветеринарной гериатрии.

Практическая значимость. Установлен высокий терапевтический эффект Гепакардина при лечении старых животных с различными возрастными заболеваниями: сердца, печени, суставов, нарушениями антиоксидантного статуса организма. Разработаны методические рекомендации по применению препарата Гепакардин в ветеринарии.

Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на XIX Международной научно-практической конференции фармакологов и токсикологии (Санкт-Петербург, 2007), I международном конгрессе ветеринарных фармакологов "Эффективные и безопасные лекарственные средства" (Санкт-Петербург, 2008), Всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Разработка рецептуры Гепакардина и определение его средней терапевтической дозы.

  2. Определение на лабораторных животных безвредности препарата Гепакардин (острая токсичность, хроническая токсичность, эмбриотоксичность, тератогенность)

  3. Изучение противотоксических и гепатопротекторных свойств препарата.

  4. Изучение кардиопротекторных свойств препарата Гепакардин.

  5. Эффективность применения препарата Гепакардин в качестве гериатрического средства для животных старшей возрастной группы.

Публикация материалов исследований. По теме диссертации опубликовано восемь научных работ, две из них – в рецензируемом журнале ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура работы. Диссертация включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. Диссертационная работа изложена на 140 страницах компьютерного текста, содержит 22 таблицы и 30 рисунков. Список литературы включает 183 источника, из них 57 иностранных авторов.


  1. Собственные исследования

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 2006 по 2010 год на кафедре фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

В экспериментальных условиях предметом исследований служили 372 белые крысы линии «Wistar» и 60 белых беспородных мышей. Препарат испытан на 131 собаке и 42 кошках с различными возрастными заболеваниями в условиях производства на базе ветеринарной клиники Института Ветеринарной Биологии и приюта для собак г. Санкт-Петербурга, а также в РВС Московского и Фрунзенского районов г. Санкт-Петербурга и в питомнике для собак г. Якутска.

В работе были использованы фармакологические, гематологические, биохимические, токсикологические и другие методы исследования.

Определение терапевтической дозы препарата устанавливали при проявлении его кардио– и гепатопротекторных свойств.

Из фармакологических свойств Гепакардина были исследованы кардиопротекторное, противотоксическое, гепатопротекторное, хондропротекторное и антиоксидантное действия.

Кардиопротекторное действие Гепакардина определяли с использованием модели острой кардиомиопатии, вызванной введением адреналина. Для этого нами была модифицирована модель на крысах острой сердечной недостаточности с повреждением миокарда.

Опытным путем была установлена доза 0,1% р-ра адреналина гидрохлорида, вызывавшая при однократном подкожном введении гибель 50% испытуемых животных (LD50) и характеризующаяся четкими проявлениями кардиомиопатии на электрокардиограмме (ЭКГ). Она составила 4 мг/ кг. (Чуваев И.В., 2009).

Исследование по изучению кардиопротекторных свойств Гепакардина проводили на 4 группах крыс по 10 голов в каждой: Гепакардин (1группа) и препарат сравнения – рибоксин (2 группа) задавали внутрь в дозе 50 мг/кг и 40 мг/кг соответственно, 1 раз в сутки, в течение 14 дней до интоксикации; 3 группа – контроль (препараты не получали, интоксикации подвергались); 4 группа – интактные (препараты не получали, интоксикации не подвергались).

Эффективность препарата оценивали по общему состоянию животных после интоксикации, изменениям на ЭКГ, наличию тропонина I в крови и гистологической картине в миокарде крыс в сравнении с контрольными группами.

ЭКГ снимали через 24 ч после инъекции адреналина на кардиографе CardiMax FX -7102.

Тропонин I в сыворотке крови лабораторных животных определяли иммунохроматографическим методом (HiSense TnI Card) через 48 ч после интоксикации.

Изучение гепатопротекторных свойств Гепакардина выполняли с использованием модели острого гепатита. Для этого внутрибрюшинно вводили четыреххлористый углерод (CCl4), в форме 50% раствора на вазелиновом масле, 1 раз в сутки, 3 дня подряд в дозе 0,4 мл/кг (Брытов А.В., 2007).

Опыт проводили на 5 группах крыс по 10 голов: Гепакардин давали внутрь в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней до интоксикации (1 группа) и после интоксикации до окончания опыта (2 группа); препарат сравнения – Карсил (3 группа) задавали внутрь в дозе 5 мг/кг 1раз в сутки в течение 14 дней до интоксикации; 4 группа - контроль; 5 группа - интактные.

О гепатопротекторном действии препарата судили по общему состоянию животных, клиническому и биохимическому анализам крови, взятым на 5-й день после окончания интоксикации.

Противотоксическое действие Гепакардина определяли на модели острого гепатита, вызванного этиловым спиртом. Этанол вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 4г/кг в концентрации 24%. Интоксикацию проводили 3-х кратно с интервалом в 24 часа

Испытание провели на 4 группах крыс по 10 голов: Гепакардин (1 группа) и препарат сравнения - Карсил (2 группа) давали внутрь в дозе 50 мг/кг и 5 мг/кг соответственно, 1 раз в сутки, 14 дней до и после интоксикаций; 3 группа – контроль; 4 группа – интактные.

При проведении каждой интоксикации учитывали время засыпания (принятие бокового положения) и длительность алкогольного сна; по окончании испытания у крыс брали кровь для проведения биохимических исследований.

Изучение острой токсичности препарата Гепакардин проводили методом постановки биологической пробы на белых беспородных мышах. ЛД50 определяли по методу Кербера.

Изучение хронической токсичности препарата Гепакардин было выполнено на белых крысах в течение трех месяцев.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препарата Гепакардин проводили на белых крысах.

Подробно методы определения токсичности препарата Гепакардин приведены в соответствующих разделах.

Клинические испытания препарата Гепакардин провели в несколько этапов.

На первом этапе испытаний действие препарата было изучено на 10 беспородных собаках старше 10 лет с различными возрастными заболеваниями, на базе приюта для собак г.Санкт-Петербурга. Эффективность лечения оценивали по изменению общего состояния, биохимическому и клиническому анализам крови на момент начала и окончания опыта.

Второй этап испытаний провели на 40 собаках и 42 кошках старшей возрастной группы на базе ветеринарной клиники ООО «Институт Ветеринарной Биологии» г. Санкт-Петербурга. Эффективность лечения оценивали по общему состоянию, биохимическому и клиническому анализам крови на момент начала и окончания опыта.

Испытание препарата проводили также на 20 собаках средней возрастной группы породы якутская лайка, в питомнике «Арктик–Трэвел» г. Якутска, а также на 61 собаке старшей возрастной группы на базе РВС г. Санкт-Петербурга. Эффективность лечения оценивали по общему состоянию животных и биохимическим показателям сыворотки крови в сравнении с контрольной группой.

Гематологические показатели определяли на автоматическом гематологическом анализаторе Picoscale PS-4, где подсчет форменных элементов основан на счете электрических импульсов, вызванных исследуемыми частицами.

Биохимические показатели сыворотки крови (уровень АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы, креатинина, мочевины, общего белка, общего билирубина, кальция, фосфора) определяли фотометрическим методом на биохимическом анализаторе Stat Fax 1904 Plus (США).

Уровень перекисного окисления липидов оценивали следующим образом: концентрацию малонового диальдегида устанавливали методом с тиобарбитуратовой кислотой, концентрацию диенкетонов - модифицированным методом Плацера на кафедре биохимии СПбГАВМ.

Статистическую обработку проводили с использованием критерия Стьюдента, рассчитанного по формулам для относительных величин.


3. Результаты исследований

3.1. Разработка нового политропного гериатрического средства

У старых животных встречается целый ряд заболеваний опорно-двигательного аппарата, почечная, сердечная и печеночная недостаточности, а также онкологические болезни (Данилевская Н.В., Николаев А.А., 2002; National Research Council , 2006). По мере взросления в организме увеличивается количество продуктов перекисного окисления липидов в связи с ослаблением антиоксидантной защиты, что уменьшает жизненный потенциал и увеличивает риск развития новых болезней, ассоциированных со старческим возрастом (Крутько В.Н., 2002).

Учитывая данный спектр наиболее часто регистрируемых возрастных изменений у домашних животных, нами был разработан политропный гериатрический препарат Гепакардин. Фармакологический эффект препарата обусловлен входящими в его состав компонентами:

- витамин Е (α – токоферол) - является антиоксидантом, тормозит перекисное окисление липидов биологических мембран благодаря взаимодействию со свободными радикалами и образованием быстро разлагающегося семихинона.

- селен – метионин является наиболее усвояемой формой органически связанного селена, который входит в состав многих жизненно важных ферментов, в том числе глутатионпероксидазы – фермента, являющегося составной частью антиоксидантной системы организма.

Таким образом, оба компонента (витамин Е и селен) являются синергистами и действуют на разных стадиях перекисного окисления, обеспечивая мощную защиту организма от оксидантного стресса.

- глюкозамина гидрохлорид и хондроитина сульфат - обладают протективным действием в отношении хондроцитов, способствуют их восстановлению при повреждениях, нормализуют продукцию внутрисуставной жидкости, стимулируют синтез глюкозаминогликанов, тем самым ускоряют процессы репарации костной ткани, тормозят прогрессирование остеоартроза.

- кальция глюконат – восполняет дефицит кальция, часто встречающийся у старых животных (Scarlett J.M., 1998).

- экстракт корня женьшеня (Panax ginseng) содержит сапониновые гликозиды, эфирные и жирные масла, обладающие адаптогенными свойствами.

- экстракт расторопши пятнистой (Silybum marianum) содержит флавоноиды (силибин, силикристин, силидианин), проявляющие гепатопротекторное и мембраностабилизирующее действие (Campos R., 1989; Давчев П., 1981).

- экстракт чаги березовой (Inonotus obliquus) - содержит широкий спектр биологически активных веществ, в т.ч. хромогенный полифенолкарбоновый комплекс, проявляющий противоопухолевое, гастро– и гепатопротективное свойства (Cui Y., Kim D.S., 2005; Саакян К.Р., 2004).

На моделях острой кардиомиопатии, с использованием 0,1% раствора адреналина гидрохлорида и острого гепатита, вызванного парентеральным введением четыреххлористого углерода, была установлена средняя терапевтическая суточная доза препарата Гепакардин. Она составила 50 мг/ кг.


3.2. Фармакологические свойства Гепакардина

Кардиопротекторное действие препарата Гепакардин было изучено на модели острой кардиомиопатии, вызванной введением адреналина. Известно, что большие дозы адреналина способны вызывать у животных повреждение миокарда, и оно бывает настолько выраженным, что в сердце возникают некротические очаги, схожие с инфарктными (Меерсон Ф.З., 1984; Гоффман Б., 2006).

Было установлено, что смертность животных в контрольной группе после интоксикации составила 50%. У выживших крыс из этой группы были выявлены на ЭКГ четкие изменения, характерные для некроза клеток сердечной мышцы (рис.1): подъем сегмента ST выше изолинии дугой, выпуклостью кверху, в виде монофазной кривой, при этом сегмент ST сливался с положительным зубцом Т; вольтаж зубцов был слишком занижен; наблюдалось замедление сердечного ритма (Орлов В.Н., 1983).

Таблица 1

Влияние профилактического применения препарата Гепакардин на сердце в условиях острой интоксикации 0,1 % раствором адреналина гидрохлорида

Группа

Показатель

1

(Гепакардин)

2

(Рибоксин)

3

(контроль)

4

(интактные)

% выживших животных после интоксикации

100

100

50

100

% «+» реакций на

Тропонин I

40

50

100

0

В крови всех крыс из группы контроля было установлено наличие Тропонина I, являющегося наиболее значимым и специфичным маркером повреждения миокарда (Целуйко В.И., 2003).

В группах крыс, получавших Гепакардин и Рибоксин, гибели не наблюдалось; выраженные патологические изменения на ЭКГ регистрировали лишь у 50% подопытных животных (рис.2); наличие в крови Тропонина I было выявлено у 40% крыс, получавших Гепакардин и у 50% - получавших Рибоксин (табл. 1).

Повреждение кардиомиоцитов в результате токсического действия больших доз адреналина подтверждали при гистологическом исследовании миокарда крыс из контрольной группы наличием изменений, ведущих к некрозу кардиомиоцитов: отсутствие сарколеммы, глыбчатость цитоплазмы; лизис ядер, а в некоторых клетках – полное их отсутствие; в некоторых образцах миокарда обнаружили участки с более светлой окраской мышечной ткани, что дало возможность предположить ишемию миокарда.

При исследовании миокарда крыс, получавших Гепакардин и Рибоксин, были выявлены признаки зернистой дистрофии: набухание цитоплазмы, нечеткие границы клеток и ядра; ядра кардиомиоцитов были слабо окрашены, с нечеткими границами; сарколемма сохранялась; окраска мышечных волокон была неоднородна.



Рис. 1. ЭКГ крысы, получавшей Гепакардин, через 24 ч. после интоксикации




Рис. 2. ЭКГ крысы из группы контроля, через 24 ч. после интоксикации

Таким образом, результаты опыта подтвердили наличие у препарата Гепакардин кардиопротекторных свойств, т.е. способности оптимизировать работу и функцию сердца и предупреждать повреждающее действие экзогенных факторов на миокард.

Гепатопротекторное действие препарата Гепакардин было изучено с использованием модели острого гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом (ЧХУ). ЧХУ, один из самых агрессивных ксенобиотиков, также является специфическим гепатотропным ядом, вызывающим в сублетальных дозах развитие острого и хронического гепатита, цирроза печени (Holland J.J., 1980; Suja V., Shyamaladevi C.S., 1997).

Введение ЧХУ вызывало гибель 30% животных в группе контроля (4 группа). В группе крыс, получавших Гепакардин до и во время затравки (2 группа), а также в группе, получавших Карсил (3 группа), гибели не наблюдалась; в группе, получавших Гепакардин только в течение 14 дней до интоксикации (1 группа), гибель составила только 10% (табл. 2).

Таблица 2

Изменение живой массы лабораторных животных при интоксикации ЧХУ

Показатели

группа №

Смертность,

%

Масса, до опыта, г

Масса, после опыта, г

Разница в весе, %

1 (Гепакардин)

10

400

406

+1,5%

2 (Гепакардин)

0

408

432

+ 5,9%

3 (Карсил)

0

405

416

+ 2,7 %

4 (контроль)

30

415

400

-3,6%

5 (интактные)

0

406,7

413,3

+1,8%


Таблица 3

Влияние применения препарата Гепакардин на изменение некоторых биохимических показателей сыворотки крови крыс на фоне трехкратной затравки ЧХУ (среднее по группам) в сравнении с препаратом Карсил

Показатель

Группа

АЛТ,

мкмоль/л

АСТ,

мкмоль/л

Креатинин

ммоль/л

Щелочная

фосфатаза

Ед/л

Общий

белок,

г/л

1

1,45±0,08**

2,4±0,05**

56,65±2,66**

96,15±16,74**

68,4±2,63

2

1,2±0,09**

2,4±0,09**

59,8± 0,75

99,4±0,71**

62,5±1,20

3

1,3±0,07**

2,3±0,08**

64,7± 3,44

100,34± 2,3 **

64,0±2,15

4

4,15±2,04*

4,75±1,86*

68,5±6,56

64,7±8,51*

54,4±6,52

5

1,23±0,12**

2,4±0,25**

63,3±6,40

128,1±24,85**

63,1±3,13

Примечания

*- значения достоверные в сравнении с пассивным контролем р<0.05

**- значения достоверные в сравнении с активным контролем р<0.05

Следует отметить, что у животных, получавших Гепакардин, живая масса в течение опыта увеличивалась (на 1,5 и 5,9 % начальной), в то время как у крыс из группы контроля она снизилась на 3,6% (табл. 2). У животных, получавших препарат Карсил, масса увеличилась на 2,7%.

У крыс из группы контроля в сыворотке крови (табл.3) было повышено содержание таких ферментов, как аланин– и аспартатаминотрасферазы (АЛТ и АСТ) на 70,3% и 49,5% соответственно (по сравнению с контролем) увеличивающихся при разрушении клеток печени. Использование с профилактической и лечебной целью Гепакардина не вызывало достоверных изменений показателей АЛТ и АСТ по сравнению с интактными животными и группой крыс, получавших Карсил.

Снижение количества общего белка в сыворотке крови крыс группы контроля по сравнению с интактными (на 13,7%) характерно также для токсического поражения печени (Уиллард М., 2004). В сыворотке крови животных, получавших Гепакардин и Карсил, наблюдалось незначительное снижение (на 0,9%) и повышение количества общего белка (на 8,3%).

Результаты проведенного исследования могут свидетельствовать о высоких гепатопротекторных свойствах Гепакардина, которое обусловлено его мембраностабилизирующим и защитным действием на микросомальную ферментативную систему гепатоцитов, метаболизирующую ксенобиотики, а также антиоксидантной активностью.

Изучение противотоксических свойств Гепакардина проводили на модели острого гепатита, вызванного интоксикацией этиловым спиртом.

Этанол в определенных дозах способен угнетать ЦНС, при этом его биотрансформация происходит в основном в гепатоцитах. Введение алкоголя усиливает свободно-радикальное окисление в печени, что также усугубляет ее алкогольное поражение (Флеминг М., 2006).

При проведении исследования было установлено, что крысы из контрольной группы и крысы, получавшие Карсил, входили в алкогольный сон (принимали боковое положение) быстрее, нежели получавшие Гепакардин.

Анализируя данные по длительности алкогольного сна (табл.4), следует отметить, что крысы подопытных групп находились в состоянии алкогольного сна достоверно меньше, чем животные контрольной группы во всех трех случаях интоксикации. Однако крысы, получавшие Гепакардин, были более активны после выхода из бокового положения (лучше реагировали на внешние раздражители, более активно двигались), чем крысы, получавшие Карсил.

Таблица 4

Время нахождения крыс в состоянии алкогольного сна, среднее по гр. (сек)

№ группы

№ интоксик.

Контрольная группа

Подопытная группа

(Гепакардин)

Подопытная

группа (Карсил)

1-я интоксикация

3470 ± 193

2681 ± 183**

2701 ± 98**

2-я интоксикация

3065 ± 132

2466 ± 214**

2503 ± 112**

3-я интоксикация

2765 ± 215 *

1757 ± 158* **

1896 ± 278 *

Примечания:

* Изменения, достоверные по отношению к первой интоксикации (Р< 0,05);

** Изменения, достоверные по отношению к соответствующим интоксикациям в контрольной группе (Р< 0,05).

Учитывая, что длительность алкогольного сна напрямую зависит от функционального состояния печени (в отличие, например, от времени принятия бокового положения после введения этанола в острой дозе), можно говорить о выраженном детоксикационном эффекте препарата Гепакардин в связи с тем, что именно в печени метаболизируется 75- 95% всего поступившего в организм этанола (Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю., 1998).

Биохимический анализ сыворотки крови через 24 ч после последней интоксикации показал, что у животных из контрольной группы показатели, характеризующие функцию печени, были выше, чем у крыс из подопытных групп (получавших Гепакардин и Карсил): АЛТ на 15,5 и 16,8 Ед/л, АСТ на 144,3 и 121,9 Ед/л, щелочная фосфатаза на 3,91 и 3,47 Ед/л соответственно. Биохимические показатели крыс из групп, подвергшихся интоксикации, достоверно отличались от интактных, что показательно для алкогольного поражения печени.

Полученные результаты свидетельствуют об эффективности применения препарата Гепакардин при остром гепатите, вызванном интоксикацией этанолом. Увеличение времени вхождения в алкогольный сон в группе крыс, получавших Гепакардин, по сравнению с контрольной, возможно, связано с нейропротекторным и адаптогенным свойствами данного препарата (Бородкин Ю.С., 1986).

3.3. Токсикологическая характеристика препарата


Исследование по изучению острой токсичности препарата было выполнено на самцах 60 белых беспородных мышей: 6 групп по 10 голов. Препарат, предварительно растворенный в 1% р-ре крахмала, вводили внутрь через желудочный зонд в объеме 0,5 мл в дозах: 100, 500, 1000, 1500 и 2000 мг/кг. Животным контрольной группы вводили 1% р-р крахмала (без препарата) в объеме 0,5 мл. Крысы находились под наблюдением 48 часов. В этот период оценивали общее состояние животных (внешний вид, состояние кожных покровов, наличие гиперсаливации, падеж), изменения в поведении, потребление корма и воды.

В указанный период все подопытные и контрольные животные имели нормальные поведенческие реакции, хороший аппетит, здоровый внешний вид. Гибели животных во всех группах в течение испытуемого периода отмечено не было. Вскрытие и визуальный осмотр внутренних органов (легкие, сердце, печень, почки, желудок) каких–либо патологических изменений не выявили. Осмотр слизистых оболочек пищевода, желудка и кишечника у всех крыс не выявил признаков раздражения.

Таким образом, по принятой классификации токсичности препаратов (Медведев Л.И., 1964г.), Гепакардин можно отнести к IV классу - малотоксичные препараты (LD50 свыше 1000 мг/кг).

Изучение хронической токсичности препарата Гепакардин было выполнено на самцах 32 белых крыс (4 группы по 8 голов), которые получали Гепакардин в дозах: 500, 300 и 100 мг/кг; 4 группа – контрольная. Препарат скармливали в течение трех месяцев (90 дней) в смеси с кормом.

В течение всего опыта животные находились под наблюдением, при этом учитывали потребление ими корма и воды, поведение, состояние шерсти и слизистых оболочек. Взвешивание животных проводилось 1 раз в 15 дней.

По истечении периода исследования было произведено взятие крови для биохимических исследований, вскрытие, визуальный осмотр и морфологическая оценка состояния внутренних органов.

Согласно полученным данным, после 90 дней применения препарата Гепакардин в пределах физиологических норм находились все показатели: общее состояние, масса тела, показатели клинического и биохимического анализов крови (АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, креатинин, общий белок, кальций, фосфор) и достоверно не отличались по отношению к контрольной группе. По результатам вскрытия и морфологического исследования органов, ежедневное пероральное применение Гепакардина крысам в дозах 500, 300 и 100 мг/кг в течение 90 дней не оказывает раздражающего действия на слизистую оболочку желудочно–кишечного тракта, а также не сопровождается развитием дистрофических изменений в паренхиматозных органах и системах организма.

Таким образом, пероральное применение препарата Гепакардин во всех изученных дозах в течение 90 дней не оказывает токсического влияния на сердце, печень, почки, углеводный и белковый виды обмена веществ организма белых крыс.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия Гепакардина проводили на белых крысах. Самок после оплодотворения разделили на группы по 10 голов: 1 и 2 группы - контрольные; 3 и 4 группы – подопытные, с 1-го дня беременности и до окончания опыта получали препарат 1 раз в сутки в дозе 100 мг/кг.

Крысы 1 и 3 групп были вскрыты на 15 день беременности; крысы 2 и 4 групп родили естественным путем.

У животных 1 и 3 группы определяли количество живых и мертвых плодов, желтых тел в яичниках, мест имплантации в матке; у живых плодов, извлеченных из матки, оценивали общее состояние, наличие отечности, кровоизлияний и уродств. У животных 2 и 4 группы определяли количество живых и мертворожденных крысят, среднюю массу плода и длину туловища, наличие аномалий.

Проведенные исследования показали, что применение Гепакардина в течение первой половины беременности достоверно не влияло ни на количество желтых тел, ни на количество мест имплантации у крыс подопытной группы по сравнению с контрольной. Сохранность потомства на 15 сутки беременности в контрольной и подопытной группах также достоверно не отличалась. Из самок контрольной и подопытной групп (1 и 3 группы) было извлечено и обследовано соответственно 91 и 96 живых плодов. Из них плоды с нормальным развитием составляли 92,3% и 95,8% в контрольной и подопытной группах соответственно. Анализ числа плодов с отклонениями в развитии не выявил достоверных отличий между контрольной и подопытной группами.

Применение Гепакардина достоверно не влияло на численность потомства у крыс. Количество живых и мертвых плодов у крыс из 2 и 4 групп достоверно не отличалось. Не выявлено достоверной разницы и в изучаемых биометрических показателях: средняя масса одного плода в контрольной и подопытной группах составляла 5,3 г и 5,1 г соответственно; средняя длина туловища новорожденных плодов так же не отличалась.

Таким образом, наши исследования, проведенные на разных сроках беременности крыс, показали, что препарат Гепакардин не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.


3.4. Клинические испытания препарата

После подтверждения высокой эффективности и безопасности препарата Гепакардин в ходе лабораторных исследований мы провели клинические испытаниям препарата в условиях производства.

Первая часть исследования была проведена на базе приюта для собак г. Санкт–Петербурга. Под наблюдением находилось 10 беспородных собак старше 10 лет. Собаки в течение всего периода исследования содержались в одинаковых условиях, получали сбалансированный сухой корм.

Перед началом исследования выполнили мониторинг общего состояния животных, а также клинический и биохимический анализы крови. При клиническом осмотре отмечалось удовлетворительное общее состояние животных, у некоторых - иктеричность слизистых оболочек, жирная себорея и тусклость шерсти, признаки кардио– и гепатопатии (глухие сердечные тоны, шумы, аритмия, увеличение границ сердца при аускультации грудной полости; болезненность при пальпации и увеличение границ печени), а также нарушения работы опорно–двигательного аппарата (хромота, шаткость походки, болезненность при движении и пальпации суставов).

Первый анализ сыворотки крови, взятый у собак перед началом приема препарата, выявил у семи из десяти животных значительное повышение таких показателей, как АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза и общий билирубин (на 64,3%, 65,7%, 107,5% и 42,4% соответственно выше нормы). Это подтверждало наличие в организме интенсивных процессов цитолиза, в первую очередь в гепатоцитах, а также, возможно, нарушение функции кардиомиоцитов, о чем свидетельствовало увеличение активности АСТ. Значительное увеличение уровня малонового диальдегида явилось показателем активно идущих процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме и наличием метаболических нарушений в различных органах и тканях (Бурмистров С.О., 1997) . Соотношение Са:Р в сыворотке крови в среднем составляло 1:1,25 (при норме 1,5: 1), что говорило о нарушении минерального обмена.

Таким образом, у всех животных было зафиксировано наличие возрастных изменений, характерных для стареющего организма (кардио- и гепатопатии, заболевания опорно–двигательного аппарата), в т.ч. усиление процессов ПОЛ.

Гепакардин задавали внутрь 1 раз в сутки, в дозе 50 мг/кг в течение 30 дней.

После месячного курса применения препарата у собак было отмечено повышение активности, улучшение динамических функций (уменьшение или отсутствие хромоты), изменение цвета слизистых оболочек (до нормального, розового), отсутствие себореи, улучшение качества шерсти, нормализация сердечного ритма, отсутствие болезненности в области печени и уменьшение границ органа до нормальных размеров при пальпации, а также отсутствие болезненности в области суставов. Для повторного проведения комплекса биохимических исследований были взяты пробы крови у каждого животного.

В сыворотке крови собак, получавших Гепакардин, наблюдали восстановление до нормальных значений практически всех исследовавшихся биохимических показателей (АЛТ, АСТ, общий билирубин, щелочная фосфатаза, малоновый диальдегид), что говорило о снижении в организме интенсивности процессов перекисного окисления липидов, улучшении функционального состояния печени и сердечной мышцы. Соотношение Са:Р в крови составило 1,25 : 1, что может говорить о нормализации кальци–фосфорного обмена у животных.

В клиническом анализе крови животных отклонений не наблюдалось, что может говорить об отсутствии токсического действия препарата Гепакардин при длительном применении.

Таким образом, после 30 дней применения препарата Гепакардин был отмечен ряд положительных изменений в состоянии собак старше 10 лет: улучшение клинического состояния животных, восстановление до нормальных значений биохимических показателей крови, характеризующих функцию печени и сердца, уровень ПОЛ и минеральный обмен.

Следующий этап клинических испытаний препарата Гепакардин проводили на базе клиники Института Ветеринарной Биологии. При этом исследовали собак и кошек в основном старшей возрастной группы. Препарат Гепакардин назначали во время кормления в дозе 50 мг/кг, 2 раза в сутки, в течение 3 - 4 недель.

Таблица 7

Влияние препарата Гепакардин на общее состояние животных

Наиболее характерные клинические признаки на момент начала лечения


Изменения клинических признаков через месяц применения препарата Гепакардин

Снижение активности, переносимости физических нагрузок;

отсутствие желания гулять

Повышение тонуса; уменьшение одышки и вялости после нагрузок; выход на прогулки с удовольствием

Периодическая рвота желчью


Отсутствие рвоты

Себорея

Отсутствие или значительное уменьшение себореи

Воспалительные процессы

(отиты, дерматиты)

Снижение местной воспалительной реакции

Хромота

Значительное уменьшение либо отсутствие хромоты

Болезненность при движении суставов конечностей, пальпации вдоль позвоночного столба

Отсутствие или значительное уменьшение

боли



Учитывая данные анамнеза, клинического осмотра и рентгенологического исследовании на момент поступления в клинику, можно было сделать вывод, что у всех животных данной группы присутствовали признаки возрастных изменений опорно–двигательного аппарата (артроз, остеоартрит, остеохондроз, дегенеративные изменения позвоночного столба, деминерализация костной ткани). По биохимическому анализу крови, взятому на момент начала исследования, у большинства животных было выявлено повышение таких биохимических показателей, как АЛТ, АСТ, общий билирубин, щелочная фосфатаза.

Как видно из табл. 7, применение препарата Гепакардин в течение месяца в терапевтической дозе (50 мг/кг), способствовало улучшению общего состояния всех испытуемых животных. Также было отмечено восстановление до нормальных значений некоторых биохимических показателей крови (АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, общий билирубин).

Дополнительные клинические испытания Гепакардина на 81 собаке средней и старшей возрастных групп на базе питомника для собак «Арктик–Трэвел» г. Якутска, Московской и Фрунзенской РВС г. СПб. также показали положительное влияние препарата на организм животных. Было отмечено повышение активности и улучшение рабочих качеств животных, быстрое и полное восстановление до нормальных значений некоторых биохимических показателей (АЛТ, АСТ, общий билирубин, креатинин, щелочная фосфатаза) по сравнению с собаками из контрольных групп.

Таким образом, при анализе полученных данных о применении препарата Гепакардин животным старшей возрастной группы можно говорить о его выраженном антиоксидантном, адаптогенном, а также хондро- , гепато - и кардиопротекторных свойствах, что позволяет его рекомендовать в качестве гериатрического средства.

Выводы


  1. Разработана рецептура политропного препарата Гепакардин, сочетающего в себе компоненты растительного и животного происхождения.

  2. Определена оптимальная лечебно-профилактическая доза препарата, которая составила 50 мг/ кг.

  3. Установлено кардио- и гепатопротекторное действие Гепакардина.

  4. Гепакардин не вызывает гибели и не оказывает токсического действия на организм лабораторных животных при однократном введении в дозе в 40 раз выше терапевтической, что позволяет отнести его к IV классу токсичности препаратов (малотоксичные).

  5. Скармливание Гепакардина в течение 30 дней в рекомендованной терапевтической дозе (50 мг /кг), а также десятикратно превышенных дозах, не выявило токсического действия на основные жизненно важные системы организма (сердечно–сосудистую, дыхательную, выделительную), функции печени и показатели гомеостаза.

  6. Гепакардин не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия на лабораторных животных.

  7. Применение Гепакардина в дозе 50 мг/кг в течение месяца дает положительный эффект у животных старшей возрастной группы: повышает активность и работоспособность, улучшает состояние печени, сердца и опорно–двигательного аппарата, а также антиоксидантную защиту организма.

  8. Установлена возможность использования комплексного препарата Гепакардин в качестве эффективного гериатрического средства в ветеринарии


Практические предложения

  1. Комплексный препарат Гепакардин может быть рекомендован для применения в повседневной практике ветеринарного врача в качестве гериатрического средства при различных возрастных заболеваниях сердца (хроническая сердечная недостаточность на фоне инфаркта, фиброза миокарда, жировой инфильтрации и др.), печени (острый и хронический гепатиты различной этиологии, гепатоз, цирроз), опорно–двигательного аппарата (артроз, остеоартрит, остеохондроз, дегенеративные изменения позвоночного столба, деминерализация костной ткани), а также в качестве антиоксидантного и адаптогенного средства.

  2. Разработаны методические рекомендации по применению «Гепакардина» в ветеринарии. Подготовлена и подана техническая документация для регистрации препарата в Департамент ветеринарии РФ.

  3. Полученные результаты используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт–Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.


Список опубликованных работ по теме диссертации


Статьи в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования и науки РФ:

  1. Чуваев И.В. Изучение гепатопротекторных свойств препарата ЧИН 3607 на модели острого гепатита/ И.В.Чуваев, С.В. Глотова, Н.Л. Андреева// Ветеринарная практика – 2008.- № 3 (42) – С. 116 – 121.

  2. Чуваев И.В. Изучение противотоксических свойств препарата ЧИН 3607 на модели острой алкогольной интоксикации / И.В. Чуваев, С.В. Глотова// Ветеринарная практика – 2009.- № 1 (44) – С. 57- 61.


Статьи, опубликованные в сборниках материалов различных конференций:

  1. Чуваев И.В. Необходимость изыскания гериатрических средств для плотоядных / И.В. Чуваев, В.Д. Соколов, С.В. Глотова// Материалы XIX Международной научно-практической конференции по фармакологии и токсикологии.- 2007.- С. 47.

  2. Чуваев И.В. Изучение противотоксических свойств препарата ЧИН3607 на модели острого гепатита/ И.В. Чуваев, С.В. Глотова, В.Д. Соколов // Материалы Первого международного конгресса ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства», С-Пб. – 2008.- С.105 – 106.

  3. Чуваев И.В.Оптимизация адреналиновой модели инфаркта миокарда на крысах / И.В. Чуваев, С.В. Глотова // Материалы Всероссийского съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», С.-Пб - 2009 – С. 28 - 31.

  4. Соколов В.Д. Сравнительный анализ обращений владельцев собак в клинику ООО «Институт Ветеринарной Биологии» за 1998 – 2008 гг./ В.Д. Соколов, И.В. Чуваев, С.В.Глотова // Материалы всероссийского съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные средства в ветеринарии» - 2009. - С. 88 - 90.

  5. Глотова С.В. Изучение острой и хронической токсичности препарата ЧИН 3607 (Гепакардин)/ С.В. Глотова// Актуальные вопросы ветеринарной биологии – 2009. - № 2(2)- С.15 – 18.

  6. Чуваев И.В. Клинические испытания препарата Гепакардин на собаках старшей возрастной группы/ И.В. Чуваев, С.В. Глотова, Н.Л. Андреева // Актуальные вопросы ветеринарной биологии – 2009.- № 4(4) - С. 24 – 30.



Лицензия ПЛД № 69-217 от 22. 10. 1997г.




Подписано в печать

Тираж 100 экз. Заказ № 228.




Отпечатано с готового оригинала-макета

в типографии ООО «Политон»

198096, Санкт-Петербург, пр. Стачек, 82

тел: 784-13-35


Добавить документ в свой блог или на сайт
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconФармако-токсикологические свойства и лечебно-профилактическая эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят и телят 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconФармако-токсикологическая характеристика энтерина 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconФармако-токсикологическая характеристика тетраголда 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconФармако-токсикологическая и терапевтическая оценка новых лекарственных форм анандина 16. 00. 04 Ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconКлиническая фармакология линимента «ар-аз» в сочетании с иммуномодулятором «тамерит» при лечении хирургических ран собак 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconПрограмма-минимум кандидатского экзамена по специальности 06. 02. 03 «Ветеринарная фармакология с токсикологией» по ветеринарным и биологическим наукам
В основу настоящей программы положены следующие дисциплины: фармакология и токсикология

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией icon06. 02. 03 – Ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconФармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconПрограмма вступительного экзамена в аспирантуру по специальной дисциплине 06. 02. 03 «Ветеринарная фармакология с токсикологией»*

Фармако-токсикологические свойства гепакардина и его применение в гериатрии 06. 02. 03 ветеринарная фармакология с токсикологией iconПрограмма-минимум кандидатского экзамена по специальности 16. 00. 04 «Ветеринарная фармакология с токсикологией» по ветеринарным и биологическим наукам

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU