Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология icon

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология





Скачать 310.34 Kb.
НазваниеВлияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Кучерук Оксана Дмитриевна
Дата конвертации29.05.2013
Размер310.34 Kb.
ТипАвтореферат диссертации
На правах рукописи


Кучерук Оксана Дмитриевна


ВЛИЯНИЕ ГЛИКОПИНА НА ИММУНОГЕНЕЗ У ЖИВОТНЫХ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ПРИМЕНЕНИИ С ВАКЦИНАМИ


06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук


Москва – 2011


Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии)


Научный руководитель: кандидат биологических наук

Устинова Галина Ивановна


Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Жидков Станислав Александрович


кандидат биологических наук

Ермолова Елена Викторовна


Ведущая организация – Федеральное государственное учреждение Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ).


Защита состоится « » 2011 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко Россельхозакадемии по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, к.1, ВИЭВ.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии.


Автореферат разослан « » 2011 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук Ездакова И.Ю.


ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ:

Гликопин (Гл.) – ветеринарный препарат, аналог ликопида. Действующим веществом является N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин (ГМДП);

Фоспpенил (Фп.) – ветеринарный препарат, 0,4%-ный раствор фосфорилированных полипренолов – ненасыщенных спиртов, относящихся к классу терпеноидов, выделяемых из хвои сосны обыкновенной;

«Нековак» – инактивированная ассоциированная гидроокисьалюминиевая вакцина, представляет собой комплекс инактивированных антигенов и анатоксинов Fusobacterium necrophorum и микроорганизмов, усугубляющих патологический процесс при некробактериозе конечностей у крупного рогатого скота (Clostridium perfringens тип A, Staphylococcus aureus, Corynebacterium pyogenes);

«Комбовак-Р» – инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят;

Моновакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота – опытные серии экспериментальных инактивированных моновакцин против аденовирусной инфекции, вирусной диареи крупного рогатого скота, изготовленные на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина;

Бивалентная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота – экспериментальная ассоциированная инактивированная культуральная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рога­того скота, изготовленная на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина;

РН – реакция нейтрализации;

РДП – реакция диффузионной преципитации;

РСК – реакция связывания комплемента.


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Многолетний опыт борьбы с инфекционными болезнями показал, что наиболее эффективным способом защиты животных является иммунопрофилактика. Применение вакцин позволяет разорвать эпизоотическую цепь, воздействуя на организм животных, увеличивает их устойчивость к болезнетворному агенту.

К сожалению, не для всех инфекционных болезней созданы вакцинные препараты, обеспечивающие надежную защиту животных. Успех вакцинации во многом зависит от качества антигена и способа его применения: доза, кратность вакцинации, интервалы между прививками, метод аппликации антигена.

Не последнее значение при этом имеет состояние организма самого вакцинируемого животного. Критерием оценки вакцины является создание напряженного и продолжительного иммунитета путем максимального вовлечения в механизм иммуногенеза защитных сил организма животного. Известно, что иммунная реакция организма зависит от его филогенетических особенностей и физиологического состояния, а также от факторов внешней среды, влияющих на состояние организма животных.

Ю.Н.Федоров (2006) отмечал, что иммунная система является индикаторной системой экологического неблагополучия, она чутко реагирует на изменения условий окружающей среды. Современная система животноводства часто способствует возникновению иммунодефицитов у животных (Юсупов Р.Х., 2007), что в свою очередь, снижает эффективность проводимой иммунопрофилактики.

Повышение иммуногенности вакцин и создание стойкого и продолжительного иммунитета у животных при вакцинации против бактериальных и вирусных инфекций, а также поиск новых способов для усиления эффективности вакцинации при помощи стимулирующих веществ, способствующих повышению иммунной защиты животных, продолжает оставаться актуальной проблемой животноводства и ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы было изучение возможности стимуляции иммуногенеза у животных при применении гликопина в сочетании с бактериальными и вирусными вакцинами.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

– определить оптимальную дозу гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак»;

– изучить динамику показателей клеточного и гуморального иммунитета коров при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

– изучить различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

– установить влияние гликопина на повышение эффективности иммунизации глубокостельных коров вакциной «Комбовак – Р» для повышения колострального иммунитета у их потомства при профилактике инфекционного ринотрахеита;

– выявить стимулирующее действие гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Научная новизна работы. Впервые была определена оптимальная доза гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак», разработаны и изучены различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином.

Впервые показана эффективность дополнительного введения гликопина при вакцинации глубокостельных коров против ИРТ.

Впервые показана эффективность применения иммуномодуляторов гликопина и фоспренила в сочетании с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Практическая значимость. Результаты исследований были использованы при разработке методических рекомендаций: «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов». Методические рекомендации рассмотрены, одобрены Ученым Советом ВИЭВ, секцией «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (протокол №3 от 14.10.2005), утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (28.12.2005).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г. Щелково, 2005); 3-й конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2006); международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии», посвященной 80-летию кафедры биохимии ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2008); секции «Ветеринарная биотехнология» Россельхозакадемии (г. Щелково, 2008).

Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся:

– данные, полученные при применении гликопина с вакциной против некробактериоза крупного рогатого скота: определение оптимальной дозы гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак», динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета, различные схемы иммунизации крупного рогатого скота вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином;

– результаты исследований по применению гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота;

– результаты исследований по применению гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК Российской Федерации.

Личный вклад соискателя заключается в проведении экспериментальных исследований по применению гликопина при вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза; в проведении исследований по применению гликопина с вакциной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и при сравнительном испытании иммуномодуляторов с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; обобщении и анализе результатов исследований.

Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи д.б.н., профессору В.Ф.Полякову.

В выполнении отдельных этапов, связанных c клиническим осмотром животных и диагностикой некробактериоза принимал участие д.в.н., профессор А.А.Сидорчук, проведении серологических исследований – д.в.н., профессор Р.В.Белоусова, к.б.н. Т.П.Лобова, к.в.н. Вазир Ясер, за что автор приносит им свою благодарность.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах, и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, их обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 258 источников, из них 186 отечественных и 72 зарубежных и приложений на 8 страницах. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 37 рисунками.


СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ


МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ


Работа проведена в 1997 – 2008 гг. в соответствии с Российской Научно-технической программой по фундаментальным и приоритетным прикладным исследованиям по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса (АПК), заданию 02.04.01 «Испытание нового иммуностимулятора гликопина в качестве адъюванта при конструировании вакцин против инфекционных болезней сельскохозяйственных животных» на базе лаборатории молекулярной биологии и биохимии Всероссийского Научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ) им. Я.Р.Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН). Исследования выполнены в хозяйствах Московской области, неблагополучных по некробактериозу крупного рогатого скота (совхозе «Истринский», акционерном обществе закрытого типа (АОЗТ) «Фаустово», учебном хозяйстве Коломенского аграрного колледжа) и ринотрахеиту крупного рогатого скота (Государственном племенном заводе (ГПЗ) «Петровское»), на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек) и кафедре вирусологии Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (МГАВМиБ) им. К.И.Скрябина.

В качестве иммуномодуляторов применяли гликопин и фоспренил.

В исследованиях использовали следующие вакцинные препараты:

– инактивированная ассоциированная вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота «Нековак», разработанная учеными ВИЭВ (А.А.Сидорчук, С.Д.Панасюк, Г.И.Устинова, 1997);

– инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят «Комбовак-Р», изготовленная Научно-Производственным Объединением (НПО) «НАРВАК»;

– опытные серии экспериментальных инактивированных моновакцин против аденовирусной инфекции, вирусной диареи крупного рогатого скота, а также ассоциированной инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рога­того скота, изготовленные на кафедре вирусологии ФГУ МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.

Схемы проведения исследований.

Первым этапом нашей работы являлось изучение влияния гликопина на показатели иммуногенеза и резистентности животных при вакцинации против некробактериоза крупного рогатого скота.

Вакцину «Нековак», согласно наставлению, вводили животным двукратно с интервалом 30 суток подкожно в область надколенной кожной складки в дозе 5,0 мл.

В первом опыте определили оптимальную дозу гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак».

В исследованиях использовали 25 клинически здоровых коров, из которых по принципу аналогов были сформированы пять групп.

Животных первой, второй, третьей и четвертой подопытных групп иммунизировали вакциной «Нековак» совместно с гликопином в расчете 1; 2; 3; 4 мг на дозу вакцины соответственно.

Животные пятой группы были контрольными, им вводили вакцину «Нековак» без гликопина.

Гликопин вводили во флакон с вакциной.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 сутки после первой, а также второй вакцинации.

В последующем была изучена динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета и резистентности коров при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с оптимальной дозой гликопина (2 мг).

По принципу аналогов были отобраны четыре группы по пять голов клинически здоровых животных и три группы по пять животных с поражением конечностей.

Исследования проводили по схеме:

№ гр.

Клиническое состояние животных

Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1

Животные с поражением конечностей

«Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2

Здоровые животные

«Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3

Животные с поражением конечностей

«Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4

Здоровые животные

«Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5

Животные с поражением конечностей

Гл. 2 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

6

Здоровые животные

Гл. 2 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

7

Здоровые животные

Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.

Кровь у животных брали перед вакцинацией, через 7, 14, 21 и 30 суток после первой и второй вакцинации.

Изучение влияния различных схем введения гликопина с вакциной «Нековак» на иммунный ответ и показатели резистентности у крупного рогатого скота проводили в двух хозяйствах Московской области, неблагополучных по некробактериозу.

Первый опыт проводили на 25 коровах без клинических признаков некробактериоза. Было сформировано 5 групп по принципу аналогов.

Исследования проводили по следующей схеме:

№ гр

Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1

Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2

Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед вакцинацией за 7 и 5 суток; «Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3

«Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4

«Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

5

Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.


Для исследований брали кровь перед первым введением препаратов, через 10, 20 и 30 суток после 1 и 2-й вакцинаций.


Во втором опыте были использованы 20 коров, 15 из которых – с поражением конечностей и 5 – без проявления клинических признаков некробактериоза. Из больных были сформированы три подопытные группы по 5 голов. Группа здоровых животных служила контролем.

Исследования проводили по схеме, указанной ниже:

№ гр

Клиническое состояние животных

Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1

Животные с поражением конечностей

Гл. 5 мг в 2 мл физ. раствора двукратно внутримышечно перед первой и второй вакцинацией за 7 суток;

«Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

2

Животные с поражением конечностей

«Нековак» 5 мл + Гл. совместно с вакциной двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

3

Животные с поражением конечностей

«Нековак» 5 мл двукратно подкожно с интервалом 30 суток.

4

Здоровые животные

Физ. раствор 2 мл двукратно внутримышечно с интервалом 30 суток.


Кровь для исследований у животных брали перед первым введением препаратов, через 21 и 30 суток после первой и второй вакцинаций.

В крови определяли содержание Т- и В-лимфоцитов и фагоцитарную активность лейкоцитов. В сыворотке крови изучали бактерицидную активность, активность лизоцима и содержание иммуноглобулинов М и G.

Вторым этапом работы являлось изучение влияния гликопина на повышение эффективности иммунизации коров 6,5 – 7,5 мес. стельности вакциной «Комбовак – Р» для повышения колострального иммунитета при профилактике инфекционного ринотрахеита (ИРТ) у потомства.

Животным вакцину вводили внутримышечно в дозе 3 мл за 50-55 суток до отела. Из вакцинированных коров отобрали 40 голов по принципу аналогов и 20-ти из них параллельно с повторной вакцинацией дополнительно внутримышечно ввели гликопин в дозе 3 мг в 2 мл физ. раствора. Повторную иммунизацию 40 коров проводили через 14 суток.

Из полученного от 40 коров потомства по принципу аналогов отобрали 10 телят от коров, иммунизированных вакциной в сочетании с гликопином (подопытная группа), и 10 телят от коров, иммунизированных одной вакциной (контрольная группа).

Взятие крови у коров для исследований проводили перед вакцинацией и через 2-3 суток после отела, у телят – на 2 и 10 сутки жизни.

Эффективность комплексного применения вакцины «Комбовак-Р» и гликопина оценивали по следующим показателям: уровень специфических антител к вирусу ИРТ в РН, количество иммуноглобулинов классов М и G (IgM и IgG), бактерицидная активность сыворотки крови и содержание лизоцима в сыворотке крови, относительное количество Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарная активность лейкоцитов в крови коров до и после отела.

Для оценки влияния иммунизации коров вакциной против ИРТ в сочетании с гликопином на колостральный иммунитет новорожденных телят проводили следующие исследования: определение уровня специфических антител к вирусу ИРТ в РН, общего белка, уровня IgM и IgG, бактерицидной активности и количеству лизоцима в сыворотке крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови, определение относительного содержания Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности лейкоцитов в крови новорожденных телят.

Эпизоотическую эффективность применения вакцины в сочетании с гликопином определяли по уровню заболеваемости и гибели телят.

Третьим этапом наших исследований являлось изучение действия гликопина и фоспренила с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи (ВД) крупного рогатого скота. С этой целью нами было поставлено два эксперимента на лабораторных животных.

В первом опыте использовали Гл. и Фп. с инактивированными моновакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на крысах.

Вакцины вводили крысам дважды через 14 суток, внутримышечно, в дозе 1,0 мл, а Гл. и Фп. – однократно с первой иммунизацией, внутримышечно, в дозах 0,03 мг в 0,5 мл физ. раствора и 0,05 мл соответственно. Животным контрольной группы внутримышечно вводили физ. раствор в объеме 1,0 мл. Кровь получали через 14 суток после второго введения вакцины. В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, в сыворотке крови – титры антител в РН, РДП, РСК.

Во втором опыте применяли Гл. и Фп. с ассоциированной инактивированной культуральной вакциной против аденовирусной инфекции и ВД крупного рога­того скота (бивалентной вакциной) на кроликах.

Опыт по испытанию бивалентной вак­цины с Гл. и Фп. был постав­лен на 42 кроликах на опытной базе ВИЭВ (Вышний Волочек). Было сформировано 9 групп животных по принципу аналогов.

Исследования проводили по схеме:

№ гр

n

Вводимые препараты, дозы, кратность и способ введения

1

5

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток.

2

6

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток;

+ Фп. 0,5 мл однократно внут­римышечно.

3

3

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток;

+ Фп. 0,5 мл двукратно внут­римышечно.

4

6

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток;

+ Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ. раствора однократно внут­римышечно.

5

5

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток;

+ Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ раствора двукратно внут­римышечно.

6

5

Бивакцина 2,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток;

+ Гл. в дозе 0,5 мг в 0,5 мл физ. раствора однократно внут­римышечно.

7

3

Гл. в дозе 0,25 мг в 0,5 мл физ. раствора двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток.

8

3

Фп. 0,5 мл двукратно внут­римышечно с интервалом 14 суток.

9

6

Физ. раствор 1,0 мл двукратно внутримышечно с интервалом 14 суток.


Кровь брали от подопытных кроликов пе­ред введением препаратов, перед ревакци­нацией (через 14 суток) и через 30 суток после ре­вакцинации. В крови определяли относительное содержание Т- и В-лимфоцитов, в сыворотке крови – титры антител в реакции нейтрализации.

Методики проведения исследований

Гематологические исследования проводили, используя стандартные методики. Подсчет общего количества лейкоцитов крови осуществляли в камере Горяева. Для дифференциального подсчета лейкоцитов готовили мазки и окрашивали их по Романовскому-Гимзе. Соотношение лимфоцитов к другим видам лейкоцитов крови выражали в процентах.

Определение общего белка сыворотки крови проводили рефрактометрическим методом по Д.Ф.Преснякову (1963). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли методом фотонефелометрии по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой (1966). Фагоцитарную активность клеток крови определяли микрометодом (Кондрахин И.П., 1985). Определение активности лизоцима проводили нефелометрическим методом (Дорофейчук В.Г., 1968). Количественное определение лизоцима в сыворотке крови проводили методом диффузии в агар (Грант Х.Я., 1973). Выделение лимфоцитов из периферической крови проводили по методу, основанному на принципе различной скорости седиментации их в градиенте плотности. В качестве растворов с высокой молекулярной массой для выделения лимфоцитов использовали Ficoll-Paque, Histopaque – 1077 или Ficoll 400 в сочетании с верографином (Кондрахин И.П., 1985). Идентификацию Т- и В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования (Кондрахин И.П., 1985). Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов M и G (IgM, IgG) в испытуемых сыворотках крови животных проводили методом радиальной иммунодиффузии по G. Mancini (1965). Моноспецифические антисыворотки были получены из лаборатории иммунологии ВИЭВ, за что автор выражает свою благодарность д.б.н., профессору Ю.Н.Федорову.

РН использовали для определения титров антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота, аденовирусу крупного рогатого скота и вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота по общепринятым методикам.

Титры преципитирующих и комплементсвязывающих антител к вирусу диареи (ВД) крупного рогатого скота и аденовирусу крупного рогатого скота определяли в РДП и РСК по общепринятым методикам.

При проведении работы было использовано 145 коров и нетелей, 20 телят, 70 крыс и 42 кролика.

Взятие крови у животных проводили утром перед их кормлением.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с использованием компьютерной программы Biostat для Windows.

Вероятность различий считали достоверной при р ≤ 0,05.


РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Применение гликопина при вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза

Изучение действия гликопина в комплексе с вакциной против некробактериоза крупного рогатого скота показало его участие в усилении иммунологической защиты животных против данной болезни, что важно, учитывая мнение ряда ученых о снижении общей резистентности организма, как основном условии возникновения данной болезни (Я.Р.Коваленко, 1948; А.А. Самоловов, 2001; Ю.Д. Караваев, 2003; А.А. Сидорчук, 2006).


Определение оптимальной дозы гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак»

Для оптимизации условий вакцинации против некробактериоза нами был проведен опыт, целью которого являлось определение оптимальной дозы гликопина для совместного введения его с вакциной «Нековак». Исследования показали, что гликопин в дозах 1, 2, 3 и 4 мг на животное при совместном введении его с вакциной оказывал стимулирующее воздействие на парметры резистентности, клеточного и гуморального иммунитета крупного рогатого скота. Введение 4 мг гликопина в дозу вакцины способствовало увеличению бактерицидной активности сыворотки крови у коров до 5; активности лизоцима – до 38; фагоцитарной активности лейкоцитов крови – до 8; содержание Т-лимфоцитов в крови – в пределах 7; содержание В-лимфоцитов – в пределах 11; уровня IgM в сыворотке крови – в пределах 34 и IgG – в пределах 11% относительно исходных значений.

Количественные характеристики показателей резистентности, клеточного и гуморального иммунитета у коров, которым вводили вакцину с гликопином в дозе 2 и 3 мг на животное, были также высоки. Через 21 сутки после повторной вакцинации бактерицидная активность сыворотки крови была на 5,3 и 7; активность лизоцима – на 16,2 и 18; относительное содержание Т-лимфоцитов – на 6,3 и 4,7; В-лимфоцитов – на 10,6 и 11,4; уровень IgM – на 17,6 и 20,3% соответственно больше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Нами установлено, что изменения данных показателей у коров, которым с вакциной вводили гликопин в дозе 2 и 3 мг на животное отличались незначительно, а некоторые были выше у животных, иммунизированных вакциной с гликопином в дозе 2 мг. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов у них в крови увеличилось на 6,1; В-лимфоцитов – на 9,7; уровень IgM – на 33,9; IgG – на 8,1% в сравнении с 5,8; 10; 32,8 и 8% соответственно у коров, получавших с вакциной гликопин в дозе 3 мг на животное. Исходя из этого, мы определили дозу 2 мг гликопина как оптимальную по гомеостатической емкости регуляторных систем организма животных для стимуляции иммунного ответа при применении с вакциной против некробактериоза. И это позволило использовать указанную дозу в наших дальнейших исследованиях при применении гликопина совместно с вакциной «Нековак».


Динамика показателей клеточного, гуморального иммунитета и резистентности животных при иммунизации их вакциной «Нековак» в сочетании с гликопином

В опыте по изучению динамики иммунологических показателей у крупного рогатого скота при вакцинации его против некробактериоза в сочетании с гликопином нами выявлено стимулирующее влияние гликопина при иммунизации больных и здоровых животных. Количественные сдвиги в иммунологических показателях крови у больных и здоровых животных, иммунизированных вакциной совместно с гликопином, были больше, чем у коров, иммунизированных одной вакциной. Так, активность лизоцима была выше соответственно на 10,1 и 16,8%, содержание Т-лимфоцитов – на 3 и 3,4%, содержание В-лимфоцитов – на 4,6 и 10,5%, уровень IgM – на 17,9 и 16% и IgG – на 10 и 9,7%. Следует отметить, что при вакцинации больных животных в сочетании с гликопином, параметры содержания В-лимфоцитов, уровня IgM и IgG, фагоцитарной активности лимфоцитов и активности лизоцима сыворотки крови достигали уровня здоровых коров.

Влияние на иммуногенез крупного рогатого скота различных схем применения вакцины «Нековак» в сочетании с гликопином


При изучении различных схем применения вакцины против некробактериоза с гликопином нами было установлено, что у животных без клинических проявлений некробактериоза, как иммунизированных совместно с гликопином, так и у получавших гликопин перед вакцинацией, уровень показателей резистентности, клеточного и гуморального иммунитета был несколько выше, чем у крупного рогатого скота, иммунизированного против некробактериоза вакциной без гликопина. Наибольшие показатели иммунного ответа были получены у коров при двукратном введении гликопина перед началом вакцинации и дальнейшей иммунизации животных совместно с гликопином. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов крови у них было на 26,2; В-лимфоцитов – на 10,8; содержание IgM – на 22,6; IgG – на 8,5% больше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной.

Нашими исследованиями по определению схем вакцинации больных животных против некробактериоза установлено, что наибольших значений иммунологические показатели достигли у коров, которым за 7 суток, как до первой, так и второй иммунизации внутримышечно вводили гликопин, а затем вакцинировали совместно с гликопином. Через 30 суток после повторной вакцинации содержание Т-лимфоцитов и IgG у них сравнялось с показателями здоровых животных, а бактерицидная активность сыворотки крови была на 17, активность лизоцима сыворотки – на 51, фагоцитарная активность лейкоцитов крови – на 5, относительное содержание В-лимфоцитов – на 3, содержание IgM – на 9% выше, чем у контрольных животных. Предложенная схема применения препарата с вакциной позволила максимально повысить показатели резистентности больных животных: бактерицидную активность сыворотки крови – на 23; активность лизоцима сыворотки – на 23; фагоцитарную активность лейкоцитов крови – на 19% относительно стартовых данных, а также получить наилучший иммунный ответ на введение вакцины: относительное содержание Т- и В-лимфоцитов у них в крови через 30 суток после второй вакцинации составило соответственно 50,5 и 22,3 в сравнении с 49,3 и 21,0% у животных, вакцинированных одной вакциной. Количество IgM и IgG в сыворотке крови этих животных через 30 суток после повторной вакцинации было соответственно 3,2 и 19,9 в сравнении с 2,7 и 18,9 мг/мл у животных, иммунизированных одной вакциной.

У больных животных, вакцинированных с гликопином, сокращалась продолжительность болезни. На 20-25 сутки после второй вакцинации хромота исчезала, происходило заживление ран, в зависимости от тяжести патологического процесса. Оставались единичные случаи сильного поражения копыт, требующие дальнейшего лечения по индивидуальной схеме.

Таким образом, применение гликопина перед иммунизацией, и далее совместно с вакциной «Нековак» способствует усилению иммунологической защиты больных и здоровых животных против некробактериоза крупного рогатого скота.

Влияние гликопина в сочетании с вакциной против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота на колостральный иммунитет

у телят


Нашими исследованиями установлено, что при дополнительном внутримышечном введении гликопина стельным коровам в сочетании с комбинированной вакциной, достоверно увеличивались титры антител к вирусу ИРТ: в сыворотке крови – до 9,8 и в молозиве – до 14,2 log2 в сравнении с 8,4 (в сыворотке крови) и 10,3 log2 (в молозиве) – у животных контрольной группы, что было на 17 и 38% соответственно больше. Концентрация иммуноглобулинов M и G в сыворотке крови коров подопытной группы после отела была выше, чем в контроле на 24 и 67% соответственно.

Результаты исследований крови и молозива вакцинированных коров представлены в табл.1.

Таблица 1

Показатели иммунитета в крови и молозиве коров-матерей, вакцинированных против ИРТ (р ≤ 0,05)



Наименование

показателей

Исследование за 50-55 суток до отела (n=20)

Исследование после отела

контрольная

группа (n=10)

подопытная группа (n=10)

Титры антител

к вирусу ИРТ, log2:

в сыворотке крови

в молозиве коров



7,2 ± 0,12





8,4 ± 0,2

10,3 ± 0,1



9,8 ± 0,1

14,2 ± 0,3

Иммуноглобулины в сыворотке крови, мг/мл:

M

G



4,4 ± 0,4

16,0 ± 0,5



3,4 ± 0,4

9,0 ± 0,7



4,2 ± 0,2

15,0 ± 0,5

Фагоцитарная активность лейкоцитов крови, %

ФЧ, м.к.


16,3 ± 0,5

7,5 ± 0,2


17,9 ± 0,7

8,4 ± 0,9


22,0 ± 1,6

12,1 ± 1,5

Бактерицидная активность сыворотки крови, %


63,0 ± 1,4


64,6 ± 1,4


80,9 ± 1,2

Содержание лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл

18,2 ± 1,2

25,1 ± 1,7

32,8 ± 2,1


Результаты исследований иммунного статуса новорожденных телят, полученных от коров-матерей, иммунизированных вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита в сочетании с гликопином и без него, представлены в табл.2.

Титры антител в сыворотке крови телят подопытной группы на 2 и 10-е сутки были выше на 19 и 18% (8,2 ± 0,5 log2 и 8,5 ± 0,8 log2), чем у контрольных животных (6,9 ± 0,1 log2 и 7,2 ± 0,1 log2). Уровень IgМ и IgG в сыворотке крови телят, получавших молозиво от матерей, вакцинированных в сочетании с гликопином, на вторые сутки жизни был на 21 и 12% соответственно выше чем у контрольных животных, а на десятые – выше на 30 и 25% соответственно.

Таблица 2

Характеристика крови телят, получавших молозиво и молоко от коров-матерей, иммунизированных вакциной против ИРТ с гликопином (n=10; р ≤ 0,05)


Наименование показателей

Новорожденные телята

2-е сутки жизни

10-е сутки жизни

контрольные

подопытные

контрольные

подопытные

Титры антител к вирусу ИРТ в сыворотке крови, log2

6,9 ± 0,1

8,2 ± 0,5

7,2 ± 0,1

8,5 ± 0,82

Лейкоциты, 109

7,0 ± 0,1

7,7 ± 0,8

6,9 ± 0,5

8,7 ± 0,4

Лимфоциты, %

30,2 ± 1,1

39,4 ± 1,8

32,7 ± 0,9

45,1 ± 2,8

Т-лимфоциты, %

19,0 ± 2,3

23,8 ± 1,5

20,8 ± 1,4

25,9 ± 1,1

В-лимфоциты, %

3,8 ± 0,5

5,7 ± 0,5

5,2 ± 1,2

9,1 ± 1,4

Общий белок, г %

5,6 ±0,8

6,3 ± 0,8

5,9 ± 0,2

6,9 ± 0,4

Иммуноглобулины, мг/мл:

M

G


1,4 ±0,2

13,4 ± 0,4


1,7 ± 0,1

15,0 ± 0,4


1,0 ± 0,01

10,9 ± 0,1


1,3 ± 0,1

13,6 ± 0,2

Фагоцитарная активность лейкоцитов, %

ФЧ, м.к.


19,0 ± 0,8

4,5 ± 0,2


22,8 ± 1,2

4,6 ± 0,3


20,8 ±1,9

4,8 ± 1,2


28,1 ± 1,0

5,5 ± 0,3

Бактерицидная активность сыворотки крови, %

29,5 ± 1,9

40,7 ± 1,8

30,0 ± 2,2

45,2 ± 2,5

Содержание лизоцима в сыворотке крови, мкг/мл

18,0 ± 1,4

29,7 ± 2,2

21,2 ±1,7

34,1 ± 1,8


Данные, приведенные в таблицах, свидетельствуют о том, что титры антител к вирусу ИРТ в сыворотке крови и в молозиве коров подопытной группы после отела, а также в сыворотке крови телят подопытной группы на 2 и 10-е сутки жизни были выше, чем у контрольных животных. Концентрация иммуноглобулинов M и G, показатели резистентности в крови коров и телят подопытных групп также был значительнее, чем в контроле. Это обеспечило более эффективную защиту потомства в первые дни жизни – телята подопытной группы не болели, в то время как заболеваемость контрольных животных составила 20%.


Сравнительная оценка действия иммуномодуляторов гликопина и фоспренила в сочетании с вакцинами против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на лабораторных животных


При исследовании сыворотки крови крыс, вакцинированных аденовакциной в сочетании с Гл. или Фп., не отмечали изменений титров антител в РН в сравнении с животными, иммунизированными одной вакциной. Следует отметить, что уровень показателей клеточного иммунитета у подопытных крыс был выше, чем у животных, вакцинированных одной аденовакциной. Так, относительное количество Т-лимфоцитов в крови было на 8-9, В-лимфоцитов – на 35% больше.

У крыс, вакцинированных вакциной против вирусной диареи (ВД) в сочетании с Гл. или Фп., были установлены более высокие значения титров антител в РН в сравнении с животными, которым вводили только вакцину (6,4 и 7,2 в сравнении с 5,2 log2 соответственно). Показатели клеточного иммунитета у подопытных крыс были выше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Так, относительное содержание Т-лимфоцитов в крови – на 16 и 15% соответственно, а В-лимфоцитов – на 46% больше.

При иммунизации кроликов бивалентной вакциной против аденовирусной инфекции и ВД крупного рогатого скота в сочетании с Гл. или Фп. установлено, что через 30 суток после ревакцинации титры нейтрализующих антител в крови были выше, чем у иммунизированных одной вакциной (от 7 до 21% – к аденовирусу и от 2 до 10% – к вирусу ВД). Отмечено и увеличение показателей клеточного иммунитета у животных, вакцинированных в сочетании с Гл. и Фп. Так, относительное количество Т-лимфоцитов было больше от 6 до 16, а В-лимфоцитов – от 17 до 36%, чем у кроликов, которым вводили только вакцину. При этом следует отметить, что влияние Гл. на клеточный иммунитет было более выражено. Лучшие результаты были получены при вакцинации в сочетании с двукратным введением Гл. в дозе 0,25; однократным – в дозе 0,5 мг и двукратным введением Фп.

Таким образом, нами было установлено, что гликопин в качестве иммуномодулятора стимулирует иммуногенез при применении с вакцинами против некробактериоза, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и вирусной диареи у крупного рогатого скота, крыс и кроликов.


ВЫВОДЫ

1. Гликопин в качестве иммуномодулятора усиливает иммуногенез у крупного рогатого скота, крыс и кроликов при вакцинации против некробактериоза, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и вирусной диареи.

2. Оптимальной дозой гликопина для совместного применения с вакциной «Нековак» против некробактериоза крупного рогатого скота является 2,0 мг на животное. Подкожное введение гликопина в этой дозе с вакциной обусловливает повышение количества Т- и В-лимфоцитов, а также содержание иммуноглобулинов IgM и IgG в сыворотке крови животных.

3. Введение гликопина больному некробактериозом крупному рогатому скоту совместно с вакциной «Нековак» обусловливает стимуляцию процесса иммуногенеза, проявляющуюся повышением активности лизоцима сыворотки и фагоцитарной активности лейкоцитов крови, увеличением количества В-лимфоцитов и содержания иммуноглобулинов классов IgM и IgG в сыворотке крови животных.

4. Для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота целесообразно предварительное двукратное внутримышечное введение гликопина с последующей двукратной иммунизацией животных вакциной «Нековак» совместно с гликопином.

5. Для оздоровления хозяйств от некробактериоза крупного рогатого скота, наряду с использованием комплекса симптоматических лечебных средств и ветеринарно-зоотехнических мероприятий, рекомендуется введение гликопина перед первой и второй иммунизацией и последующее совместное введение гликопина с вакциной «Нековак».

6. Применение гликопина с вакциной достоверно увеличивало титры антител к вирусу инфекционного ринотрахеита в сыворотке крови коров и в молозиве (9,8 и 14,2 log2 в сравнении с 8,4 и 10,3 log2 соответственно у животных контрольной группы); уровень IgМ и IgG в сыворотке крови телят, получавших молозиво от матерей, вакцинированных в сочетании с гликопином на вторые сутки жизни был на 21 и 12% соответственно выше чем у контрольных животных, а на 10-е – на 30 и 25% соответственно, что свидетельствует о стимулирующем влиянии препарата на процесс антителообразования при иммунизации глубокостельных животных вакциной «Комбовак – Р». Это обеспечило более эффективную защиту телят в первые дни жизни: телята подопытной группы не болели, в то время как в контроле заболеваемость животных составила 20%.

7. Иммуномодулятор гликопин превосходил фоспренил по своему действию на показатели клеточного иммунитета у кроликов при комплексном применении с инактивированной бивалентной вакциной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.


ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ


Методические рекомендации «Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов» могут быть использованы ветеринарными специалистами при проведении вакцинаций у животных.


СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ


1. Влияние иммуномодуляторов на антигенную активность моновалентных вакцин против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС / Я. Вазир, И.В. Третьякова, Г.И. Устинова, О.Д.Кучерук, Р.В.Белоусова // Материалы 3-й конференции по научно-методической, воспитательной и научно-практической работе академии. – Москва : МВА, 2006. – С. 230 – 232.

2. Испытание бивалентной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на кроликах с использованием иммуномодуляторов / Я. Вазир, Р.В.Белоусова, Г.И. Устинова, О.Д.Кучерук // Ветеринарная патология. – 2007. – № 3. – С. 192 – 195.

3. Иммунный ответ у крупного рогатого скота на введение вакцины против некробактериоза с иммуномодулятором Гликопином / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова, А.А.Сидорчук, С.Д.Панасюк // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). – 2009. – № 2. – С. 25 – 26.

4. Кучерук О.Д. Применение иммуномодулятора гликопина с вакциной для профилактики инфекционного ринотрахеита КРС / О.Д. Кучерук, Е.В.Жукова, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. − 2009. − Т.75. − С. 422 − 426.

5. Кучерук О.Д. Способы применения гликопина с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук, Г.И.Устинова // Труды ВИЭВ / Всерос. НИИ эксперим. ветеринарии. − 2010. − Т.76. − С. 62 − 66.

6. Кучерук О.Д. Определение оптимальной дозы гликопина при совместном введении с вакциной «Нековак» / О.Д. Кучерук // Журнал ветеринария и кормление (Веткорм). – 2011. – № 1. – С.39 – 40.

7. Применение гликопина для повышения антиинфекционной резистентности организма животных и усиления иммуногенной активности вакцинных препаратов : методические рекомендации / Г.И.Устинова, Т.М.Андронова, О.Д.Кучерук [и др.] // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины. Часть IV. Лабораторные методы исследований инфекционной патологии животных. – Москва, 2008. – С. 159 – 171.


Добавить документ в свой блог или на сайт
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconДиагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconФармакологическое обоснование применения тетраголда при колибактериозе поросят 06. 02. 03 ветеринарная фармакология и токсикология 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconГемодинамические расстройства у поросят при колибактериозе и их коррекция 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconЭпизоотологический надзор и контроль при зоонозах в поволжском регионе 16. 00. 03 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconЛечебно профилактическая эффективность пробиотика лаксубтил при колибактериозе телят 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconСпецифические терапия и профилактика кожного кандидоза плотоядных животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология icon16. 00. 03 -ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconАнтимикробная активность и лечебная эффективность комплексного препарата диоксинор при респираторных болезнях поросят 16. 00. 03 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconИммунный статус поросят при пневмонии, вызванной вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Влияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconТерапевтическая эффективность гинодиксина при эндометритах и маститах у коров, вызванных условно-патогенной микрофлорой 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 06.

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU