Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология icon

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология





Скачать 204.13 Kb.
НазваниеДиагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Ивченко Олеся Валерьевна
Дата конвертации23.05.2013
Размер204.13 Kb.
ТипАвтореферат
На правах рукописи


Ивченко Олеся Валерьевна


Диагностика малассезиозов животных


06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология


Автореферат диссертации на соискание ученой

степени кандидата ветеринарных наук


Москва- 2010

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии).


Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Литвинов Алексей Михайлович


Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Альбертян Мкртич Погосович


кандидат ветеринарных наук

Ершов Петр Петрович


Ведущая организация: Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева


Защита диссертации состоится «___» ________2010 года в «___» часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, д.24/1


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии


Автореферат разослан «___» _________2010 года


Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук И.Ю. Ездакова


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ


Актуальность темы. В настоящее время наблюдается тенденция к увеличению заболеваемости оппортунистическими микозами не только людей, но и животных. На смену дерматомикозам (микроспории, трихофитии) приходят болезни, вызываемые условно-патогенными грибами.

Одними из самых распространенных условно-патогенных грибов являются дрожжи рода Malassezia. В нашей стране ветеринарные врачи главным образом узнали об этих грибах и их роли в кожной патологии после выхода статьи Росса Бонда «Malassezia pachydermatis и кожное заболевание у собак», опубликованной в журнале WALTHAM FOCUS в 1997 году. Несмотря на то, что М. pachydermatis был выделен впервые в 1925 (Weidman) от индийского носорога, а в 1955 году (Gustafson) от собаки, широкое распространение малассезиоза у животных отмечается только в последние 2-3 десятилетия (Е.Я Головня, 2009; Л.И. Смирнова и др., 2008; А.П. Золоторубов и др., 2005). Безусловно, качество жизни - кормление, экология, разведение новых пород, с фенотипическими признаками, которые изначально предрасполагают к заболеванию, а также пород животных с нарушенной функцией иммунной системы, оказывают влияние на рост заболеваемости оппортунистическими инфекциями. При этом спектр подверженных заболеванию животных расширяется - помимо собак и кошек эта проблема становится актуальной для других видов домашних животных (коров, коз, лошадей) [D.W. Scott et al., 2003; L.H. Akucewich et al., 2007; F.А. Uzal et al., 2007; A. Hirai et al., 2004].

Таким образом, в последние годы встречаемость малассезиоза у животных продолжает нарастать, в то время как информированность специалистов остается на низком уровне (Р.С. Овчинников и др., 2007; Л.И. Смирнова и др., 2008).

Дрожжи Мalassezia - одна из самых распространенных причин отитов у собак. Немаловажную роль эти грибы играют как секундарная инфекция в развитии кожной патологии. Эти дрожжи были выделены и со слизистых оболочек органов (конъюнктивы, ротовой полости, вагины), но способны ли они вызывать патологический процесс или являются только лишь комменсалами пока неизвестно (М. Hajsig et al., 1985).

В своем клиническом проявлении малассезиоз мало отличается от схожих болезней иной этиологии и часто не диагностируется ветеринарными специалистами. При этом назначенное лечение при неправильном диагнозе будет не эффективно.

Основную трудность при выделении малассезий от животных представляет ряд физиологических особенностей этих грибов, предполагающих особые условия культивирования, что требует соответствующих знаний у ветеринарных специалистов.

Цель работы. Разработка диагностики малассезиоза животных, базирующейся на совокупности результатов эпизоотологических, клинических и лабораторных исследований.

Задачи исследований:

- изучить эпизоотологию болезни;

- изучить этиологию, течение и симптомы малассезиоза животных;

- разработать диагностику малассезиоза животных.

Научная новизна. Впервые в условиях г. Москвы получены статистические данные по распространению малассезиоза среди плотоядных животных (собак и кошек), определены эпизоотологические данные болезни, такие как сезонность, породная и видовая предрасположенность, возрастная восприимчивость. Изучен видовой состав грибов рода Malassezia у больных животных.

В процессе изучения болезни был установлен новый клинический симптом, а именно поражение волоса с изменением его окраски.

Разработана схема для культуральной диагностики малассезиоза у животных.

Практическая значимость. Получен обширный научный материал, предоставляющий возможность объективно оценить роль малассезий в возникновении и развитии болезни у животных.

Выявлен новый клинический симптом болезни, позволяющий предположить малассезиоз и своевременно провести лабораторную диагностику с последующей постановкой точного диагноза и назначением более эффективных методов лечения.

Разработаны и утверждены в установленном порядке «Методические наставления по лабораторной диагностике малассезиозов животных», которые, применимы и в специализированных ветеринарных лабораториях, и в условиях обычных ветеринарных клиник.

«Методические наставления по лабораторной диагностике малассезиозов животных» апробированы и уже используются в практической работе специалистами ветеринарных клиник - «Ветеринарный Центр Видное» (г. Видное), «Тровет» (г. Троицк); ветеринарных лабораторий – «Пастер» (г. Москва), Ленинская ветеринарная лаборатория (г. Видное).

Апробация работы. Основные результаты научно-исследовательских работ доложены: на Ученых советах и методических комиссиях ВИЭВ (2007 - 2010 гг.); на межрайонной научно – практической конференции по проблемам лабораторной диагностики болезней животных (Ленинская районная СББЖ, г. Видное, Московская область 2008 г.); на межлабораторном совещании (Московская областная ветеринарная лаборатория, г. Воскресенск, Московская область, 2010 г.); на курсах повышения квалификации директоров ветеринарных лабораторий (ФГУ «Российская академия кадрового обеспечения агропромышленного комплекса (Косино, 2009 - 2010 гг.).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей, в том числе 4 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.


Основные положения и результаты работы, выносимые на защиту:

- некоторые аспекты эпизоотологии, этиологии и симптомокомплекса малассезиоза животных;

- лабораторная диагностика малассезиоза животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах, включает 13 таблиц, 55 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 230 источников и приложения.


СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Научная работа выполнена в лаборатории микологии и антибиотиков им. А. Х. Саркисова ВИЭВ, в ветеринарной лаборатории ЗАО «Пастер» г. Москвы, в ветеринарной государственной лаборатории Ленинского района Московской обл., в ветеринарной клинике при Ленинской районной СББЖ Московской обл., ветеринарных клиниках «Ветеринарный Центр Видное» (г. Видное) и «Тровет» (г. Троицк) Московской обл. в 2007-2009 гг.


Материалы и методы исследований

Вопросы эпизоотологии, течение, симптомы и предрасполагающие заболеванию факторы мы изучали в указанных выше клиниках и лабораториях согласно общепринятым методам.

Изучение и выявление аналогий сезонности болезни для разных видов и пород животных проводились в течение 3-х лет.

С целью выявления видовой, породной, возрастной, половой предрасположенности к малассезиозу нами было исследовано 2588 образцов патологических материалов от собак и кошек.

Для определения видового состава грибов рода Malassezia было отобрано 106 образцов материала от собак и 46 - от кошек с видимыми дефектами кожи, слизистых оболочек и пограничных кожно-слизистых участков. Из отобранных образцов было выделено и идентифицировано 47 изолятов грибов рода Malassezia, изучены их культуральные свойства, морфологические признаки и физиологические особенности.

Для изучения носительства и проявления малассезиоза у канадских сфинксов были обследованы животные из питомника указанной породы.

Для отбора материала применяли методы с использованием клейкой ленты типа скотч, мазки - отпечатки на предметном стекле, соскобы с помощью скальпеля, смывы и мазки медицинским зондом или тампоном для взятия бактериологических проб. Пораженный волос обрезали с помощью ножниц.

Материал отбирали с пораженных участков от животных, не подвергавшихся медикаментозному местному или системному противогрибному лечению.

Для выделения культур грибов и изучения их свойств использовали: агар Сабуро, агар Сабуро с добавлением 1% оливкового масла, модифицированный агар Диксона, агар Леминга, модифицированный агар Leeming-Notman, кровяной агар.

Микроморфологию культур грибов изучали в неокрашенных препаратах с каплей 50% водного раствора глицерина. Микроскопию проводили в световом микроскопе при увеличении х 40.

Морфологию дрожжевых клеток в патологических материалах изучали в окрашенных различными методами препаратах, применяемых в микробиологии и гематологии. Для выбора оптимального красителя проводили окрашивание по Граму, по Романовскому-Гимза, генцианвиолетом, красителем Диахим Diff-Quik (Санкт-Петербург), красителем Лейкодиф 200 (Lachema Diagnostika, Чехия).

Для изучения физиологических особенностей выделенных грибов проводили тесты на обнаружение β – гликозидазной активности на агаре с эскулином (Merck, Германия); каталазной активности по R. Whittenbury (1964); уреазной активности на уреазном агаре по Кристенсену и на жидкой среде с мочевиной по Кристенсену; тесты на потребление липидных компонентов (твины 20, 40, 60, 80, кремофора EL) по J. Guillot (1996).

Культуральные признаки грибов изучали путем выращивания их на различных питательных средах при разных температурных режимах.

Для оценки микорезистентности выделенных культур, пользовались дискодиффузионным методом, применяемым в микробиологии. Использовали коммерческие диски антимикотиков с нистатином 100 U, кетоконазолом 10μg, клотримазолом 10μg, флюконазолом 10μg HiMedia (Индия), миконазолом 50μg , эконазолом 50μg Bio-Rad (Франция).

С целью изучения патогенности грибов Malassezia, выделенных от животных, проводили внутрибрюшинное заражение линейных белых лабораторных мышей с примерной живой массой 20 г и накожное заражение кроликов породы Бабочка живой массой 2,5 - 3,0 кг. В экспериментах использовано 48 белых мышей и 5 кроликов, принадлежащих виварию при Ленинской районной СББЖ.

Статистическую обработку и интерпретацию экспериментальных данных проводили с помощью компьютерной программы Microsoft Excel.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Вопросы эпизоотологии малассезиоза животных

В период с 2007 по 2009 гг. с целью изучения эпизоотического процесса малассезиоза у мелких домашних животных в условиях города Москвы изучали ряд факторов: видовой, породный, половой, возрастной состав больных животных, сезонность проявления болезни. Лабораторному исследованию был подвергнут патологический материал от собак и кошек. Было отобрано из ушей: 608 образцов патологических материалов от собак, 124 - от кошек; с кожи: 1038 образцов от собак, 324 - от кошек; из влагалища: 203 от собак, 28 - от кошек; из препуциального мешка: 110 от кобелей, 9 - от котов; с конъюнктивы: 76 от собак, 52 - от кошек; содержимое паранальных желез: 3 от собак; со слизистой носовых ходов: 15 образцов от кошек.

Видовая восприимчивость. В результате наших исследований мы установили, что собаки более предрасположены к заболеванию малассезиозом, чем кошки. Так из патологических материалов, взятых от собак, гриб Malassezia был выделен в 22% случаев, у кошек в - 4,5%.




Рис. 1. Видовая предрасположенность к малассезиозу.


Из материала, отобранного с пораженных и со здоровых участков кожных покровов у 10 лошадей и у 24 особей крупного рогатого скота, грибы рода Malassezia выделить не удалось.

Породная предрасположенность у собак явно имеет место. К подверженным Malassezia-отиту мы отнесли следующие породы: лабрадор, немецкая овчарка, йоркширский терьер, кокер-спаниель, такса, пудель, стаффордширский терьер, вест хайленд вайт терьер, мопс, шар-пей.

К породам предрасположенным к малассезиозному дерматиту: такса, вест хайленд вайт-терьер, лабрадор, кокер-спаниель, йоркширский терьер, английский бульдог, немецкая овчарка, пекинес.

От кошек наиболее часто гриб выделяли от беспородных особей. В 6 случаях мы выделили дрожжи Malassezia от британских короткошерстных кошек и сфинксов. Некоторые породы, например, сфинксы, подвержены малассезиозу из-за физиологических особенностей организма (выделение кожной смазки сальными железами), но за время наших исследований количество обращений хозяев с такими животными были немногочисленны. Возможно, это связано с небольшой распространенностью указанной породы. Однако нами специально с целью изучения видового состава микобиоты кожи и слизистых оболочек у кошек этой породы был обследован питомник канадских сфинксов «Тефнут». У 8 обследованных кошек грибы Мalassezia были выделены с кожи и из ушных раковин. У 2 –х кошек с конъюнктивитом и ринитом грибы выделены из патматериалов, взятых со слизистых оболочек.

Половая предрасположенность у собак не выявлена. По нашим данным, в группе больных животных, от которых были выделены грибы Malassezia, на долю кобелей приходится 51%; сук - 49%.

У котов грибы Malassezia встречались чаще, чем у кошек. От котов они выделены в 68% случаев, от кошек в 32% случаев (рис.2).




Рис. 2. Половая предрасположенность к малассезиозу у собак и кошек.


Возрастная восприимчивость. Было установлено, что малассезиозы встречаются у собак и кошек любого возраста, но молодые животные до 6 лет болеют чаще (рис. 3,4).




Рис. 3. Возрастная восприимчивость собак к малассезиозу.




Рис. 4. Возрастная восприимчивость кошек к малассезиозу.


Сезонность. Малассезиозы у собак и кошек регистрируют в г. Москве в течение всего года. Четкой зависимости заболеваемости животных от времени года не установлено. Так если графики сезонности заболеваемости у собак за 2007 и 2008 гг. указывают синхронно на рост в осенние месяцы, причем пик приходился на ноябрь, то в 2009 г., наоборот, в ноябре наблюдалось наименьшее количество заболевших собак (рис. 5).



Рис. 5. Сезонность малассезиоза у собак.

В 2008 г. и в 2009 г. число выявленных случаев заболевания малассезиозом среди котов было значительно выше в осенние месяцы. Однако по графику за 2007 г. видно, что в этом году пик заболеваемости приходился на февраль (рис. 6).




Рис. 6. Сезонность малассезиоза у кошек.


Сопоставив данные за 3 года, мы отметили незначительную тенденцию к увеличению количества больных животных в осенний период. В процентном соотношении для собак это составляет: осень - 30%, зима - 25%, весна - 21%, лето - 24% заболевших; для кошек - 39% (осень), - 27% (зима), -15% (весна), - 19% (лето) [рис.7,8].




Рис. 7. Заболеваемость собак малассезиозом в разные сезоны года.



Рис. 8. Заболеваемость кошек малассезиозом в разные сезоны года.


Контагиозность. Анализ клинико-анамнестических данных и результатов лабораторных исследований патматериалов от кошек питомника «Тефнут», а также от животных, обследованных в указанных ранее ветеринарных клиниках, позволил предположить, что передача гриба от одного животного другому возможна. Этому способствует постоянный тесный контакт между животными.

Таким образом, исследование факторов эпизотического процесса позволило установить основные закономерности распространения малассезиоза у плотоядных животных в условиях мегаполиса:имеет место видовая, породная и возрастная восприимчивость к болезни; половая предрасположенность у собак не обнаружена, коты в наших исследованиях болели малассезиозом чаще чем кошки; четкой сезонности болезни не выявлено.


Изучение видового состава малассезий у больных животных

Для определения соотношения липидозависимых грибов и липофильного M. рachydermatis на покровных тканях у собак и кошек были проведены культуральные исследования патматериала от группы больных животных.

В результате исследований 152 образцов патологического материала, отобранных от больных и подозреваемых в заболевании собак и кошек, было выделено 47 изолятов грибов рода Malassezia. Были изучены их физиологические свойства: каталазная, β – гликозидазная, уреазная активности, способность расщеплять твины -20,-40,-60,-80 и кремофор ЕL. На основании физиологических, культурально-морфологических исследований выделенные грибы были отнесены к видам: M. pachydermatis, M. restricta, M. globosa, M. sympodialis.

От собак и кошек в основном выделяли M. рachydermatis (97% и 73% соответственно). Липидозависимых видов малассезий от собак выделено всего 3%, а от кошек 27%.

Эксперименты показали, что грибы Malassezia обладают слабой патогенностью: гибели белых мышей при внутрибрюшинном заражении не зарегистрировано; при накожном заражении кроликов (скарифицированный участок кожи на внутренней поверхности уха) отмечали дерматит, протекающий в легкой форме. Это объясняется тем, что малассезиозы относятся к оппортунистическим микозам, т.е. грибы свою патогенность проявляют на фоне общего снижения резистентности, аллергического состояния или нарушения целостности кожных покровов и т.п.


Симптомокомплекс

Анализируя данные проводимых исследований в вышеуказанных лабораториях и ветеринарных клиниках, мы выявили основные формы клинического проявления малассезиоза у животных:

  • отиты;

  • дерматиты;

  • поражение волоса, с изменением окраски на бурую;

  • стоматиты, конъюнктивиты, вульвовагиниты, акропоститы, поститы, баланопоститы – ассоциативно с бактериозами.

Наружные отиты - наиболее распространенная форма проявления кожного малассезиоза. Клинические признаки были схожи с отитами паразитарной, иной грибной и бактериальной этиологии. Малассезиозные отиты у собак и кошек имели подобные симптомы. У больных животных мы наблюдали выделения из ушей от скудных до обильных. Запах выделений напоминал дрожжевой. Характер отделяемого был жидким, полужидким мажущимся, сухим в форме корочек темного цвета. Цвет экссудатов - от светло-желтого до темно-коричневого. Отиты у животных сопровождались зудом различной выраженности. Патологические процессы, протекающие с жидкими и полужидкими выделениями, были осложнены, как правило, бактериозами, в редких случаях кандидозом.

Развитие малассезиозного отита часто происходило при наличии у животных аллергии на отдельные компоненты корма. В процессе наших исследований были отмечены подобные клинические случаи у йоркширских терьеров, часто страдающих кормовой аллергией.

Малассезиозные дерматиты у собак локализовались в паху, подмышечной области, межпальцевом пространстве, у кромки губ. У пород со складчатой кожей наблюдали поражения внутри складок. При этом отмечали сальность кожи в местах поражения. Для малассезиозного дерматита характерны гиперемия, зуд, расчесы. Кожа чешуйчатая или сальная, серая или воспаленная, полностью или частично лишенная волосяного покрова. При хроническом течении болезни - утолщенная. Пораженные грибом участки межпальцевых пространств животное вылизывало, увеличивая мацерацию и площадь нарушения целостности эпидермиса, создавая тем самым благоприятные условия для развития как грибной, так и бактериальной микрофлоры. В очагах колонизации кожи малассезиями цвет волосяного покрова приобретал бурый оттенок.

У кошек малассезиозный дерматит встречался реже, чем у собак. Страдали в основном короткошерстные породы, в том числе - сфинксы. Особенностью сфинксов является образование обильной смазки, выделяемой сальными железами кожи. Причем у некоторых кошек при неправильном питании или наличии каких-либо сопутствующих болезней происходит чрезмерное выделение этого секрета с образованием сального налета на коже. Высокая температура тела животных (38,5° - 39,5°) и липидные компоненты, содержащиеся в кожном секрете, служат благоприятной средой для развития грибов Malassezia. При этом у больных животных мы регистрировали коричневый налет на коже, в ушах, вокруг ногтевого валика. Зуда и беспокойства при этом не отмечали. Поражение околоногтевого пространства клинически характеризовалось покраснением, незначительной отечностью и зудом.

Изменение цвета волосяного покрова мы отмечали в ряде случаев при малассезиозе собак. При этом волос принимал бурый оттенок, наощупь был не шелковистым, а приобретал нетипичную жесткость. При разминании пальцами пораженного волоса создавалось ощущение наличия мелкого порошка. Повышение жесткости волоса не является обязательным признаком. Пораженный грибом волос может только изменить цвет и приобрести неприятный специфический запах.

У некоторых короткошерстных пород, таких как той - терьер, карликовый пинчер, чихуа-хуа рыжей или белой масти, при малассезиозном дерматите мы регистрировали только изменения окраски волосяного покрова и зуд.

Несколько клинических случаев стоматита мы наблюдали у собак, у которых из материала, взятого с ротовой полости, грибы M. pachydermatis были выделены в большом количестве.

Малассезиозные конъюнктивиты, риниты у собак и кошек сопровождались обильными слизистыми выделениями, оставляющими коричневые дорожки на коже. Слизистые оболочки при этом были отечны и воспалены.

Вулвовагиниты, акропоститы, поститы, баланопоститы с участием грибов рода Malassezia по клиническим признакам мало отличались от таковых бактериальной этиологии. Как правило, подобные патологии протекали ассоциативно и редко бывали самостоятельными инфекциями. При этом мы регистрировали слизистые выделения, беспокойство животных (чрезмерное вылизывание пораженных участков), вызываемое зудом.

Таким образом, распространенными формами проявления малассезиоза у собак и кошек являются отиты и дерматиты. В результате исследований мы установили новый клинический симптом болезни - поражение волоса, сопровождающееся изменением его окраски и приобретением нетипичной жесткости. В процессе нашей работы мы выделили также грибы р. Malassezia со слизистых оболочек разных органов при их воспалении.


Лабораторная диагностика

С целью установления этиологии болезни мы проводили лабораторные исследования патологических материалов, отобранных от больных и подозрительных по заболеванию животных.

Лабораторная диагностика малассезиозов включает микроскопию патологического материала и выделение чистой культуры возбудителя.

Изучение и идентификацию грибов рода Malassezia осуществляли в соответствии с рекомендациями, приводимыми в руководствах J. Guillot, E. Guecho et al., (1996), В.Г. Арзуманяна (2003) и других исследователей.

Грибы Malassezia мы выделили со следующих органов:

У собак: из ушей – у 56 % обследованных животных; с кожи – у 8 %; с конъюнктивы – у 8%; из вагины – у 8%, препуция – у 2%.

У кошек: из ушей – у 15%; с кожи – у 0,9 %; слизистой носового хода - у 6,7%; из вагины – у 3,5%, препуция - у 11%.

Цитологические исследования

Грибы Malassezia имеют характерную микроморфологию - по форме напоминают земляной орех или матрешку, что существенно отличает их от других дрожжевых грибов и позволяет для постановки диагноза использовать микроскопический метод диагностики.

Более информативной оказалась микроскопия окрашенных препаратов с использованием различных методов, применяемых в микробиологии и гематологии. Клетки гриба окрашивались в синий цвет.

Наиболее четкая окраска дрожжевых клеток обеспечивалась генцианвиолетом. Кроме того, удобство метода заключается в быстроте окрашивания, доступности и низкой стоимости красителя.

При микроскопии проводили оценку количества дрожжевых клеток, используя следующие обозначения: в крестах - от одного до четырех, или количество - небольшое, умеренное, большое.

На основании полученных данных, мы пришли к выводу, что цитологическое исследование является наиболее подходящим экспресс методом диагностики малассезиоза в обычных ветеринарных клиниках из-за доступности и простоты исполнения.

Культуральные исследования

С целью выбора эффективной среды, обеспечивающей быстрый рост и более высокую плотность колоний, были проведены культуральные исследования на разных питательных средах с учетом физиологических особенностей грибов.

Грибы рода Malassezia относятся к липидзависимым (исключение M. pachydermatis). Они имеют набор ферментов, способствующих утилизации жирных кислот в качестве источника углерода, и нуждаются в липидных добавках для культивирования на питательных средах. В своих исследованиях мы использовали среды, содержащие добавки жирных, желчных кислот и твинов.

Рост липидозависимых видов отмечали только на специальных средах, таких как модифицированный агар Диксона, модифицированный агар Leeming&Notman, среда Леминга. В качестве оптимальной среды мы выбрали модифицированный агар Leeming&Notman, содержащий в своем составе компоненты, способствующие более быстрому росту малассезий: оливковое масло, бычья желчь, твин -60, глицерин, моностеарат глицерина, дрожжевой экстракт.

Грибы M. pachydermatis хорошо росли на микологических средах без липидных добавок, что явилось в свою очередь, ключом к идентификации этого вида.

Установлена зависимость роста грибов от температуры. Оптимальный температурный режим для культивирования M. рachydermatis - 370С, для липидозависимых малассезий – 320С.

При таком режиме рост колоний M. рachydermatis отмечался на 3-4 сутки, липидозависимых видов на 5-7 сутки.

Цвет колоний всех грибов рода Malassezia был от кремового до темно - коричневого, диаметр колоний варьировался от 1 до 5 мм, консистенция мягкая, крошащаяся, плотная, восковидная.

При оценке ферментативных и ассимилятивных свойств грибов р. Malassezia было установлено: уреазная активность положительная; каталазная, β-гликозидазная активность, ассимиляция твинов и кремофора EL вариабельны в зависимости от вида.

Поскольку вид малассезий, кроме M. рachydermatis, по морфологии установить невозможно, для их идентификации мы использовали диагностический ключ по J. Guillot (1996), основанный на физиологических особенностях этих грибов.

Однако для проведения рутинных лабораторных исследований указанный диагностический ключ трудоемок в исполнении, поэтому нами разработана упрощенная схема, позволяющая выделять не только M. рachydermatis, но и липидозависимые малассезии с идентификацией до вида (рис.9).

Чувствительность к антимикотикам

Завершающим этапом лабораторной диагностики болезни стало определение чувствительности выделенных культур малассезий к антимикотикам. Для этого использовали дискодиффузионный метод в чашках Петри, применяя коммерческие диски и агары: для вида M. рachydermatis - Antimycotic Sensitivity Test Agar (HiMedia, Индия); для липидозависымых видов одну из сред - Диксона, Леминга, Leeming&Notman. При инкубации соблюдали температурные режимы, установленные нами для культивирования разных видов малассезий. Учет результатов проводили через 72 часа инкубирования подготовленных систем: культура - питательная среда - диски антимикотиков. Степень ингибирования роста малассезий в указанных системах интерпретировали согласно таблицам, прилагаемым предприятиями-изготовителями дисков антимикотиков.

Из-за относительной неспецифичности клинических признаков при малассезиозе предварительный диагноз по эпизоотологическим данным и клиническим симптомам, всегда подтверждали лабораторными исследованиями.





Отбор материала от животных и

параллельный посев

на 2 питательные среды:













Агар Сабуро




Модифицированный агар Leeming-Notman



















Культивирование

при 370 С




Культивирование

при 320 С











3-4 сутки

рост колоний

только

M. рachydermatis




3-4 сутки

рост колоний

M. рachydermatis







5-7 сутки

pост липидозависимых видов Malassezia




Постановка чувствительности выделенных грибов к антимикотикам


Рис. 9. Культуральная диагностика малассезиоза у животных.

ВЫВОДЫ

1. В результате изучения эпизотического процесса малассезиоза у мелких домашних животных (собак и кошек) в условиях г. Москвы установлено:

- собаки, как вид, более восприимчивы к заболеванию малассезиозом (заболеваемость - 22%), чем кошки (заболеваемость - 4,5%);

- к породам собак, наиболее предрасположенным к малассезиозу, отнесли - лабрадора, немецкую овчарку, йоркширского терьера, кокер-спаниеля, таксу, пуделя, стаффордширского терьера, вест хайленд вайт терьера, мопса, шар-пея, йоркширского терьера, английского бульдога, пекинеса, а к породам кошек – сфинкса;

- половая предрасположенность к болезни у собак отсутствует, коты более подвержены заболеванию малассезиозом (заболеваемость – 68 %), чем кошки (заболеваемость - 32%);

- выраженная сезонность болезни отсутствует, имеется незначительная тенденция к увеличению заболеваемости животных в осенний период года.

2. На покровных тканях у больных малассезиозом животных (собак и кошек) определено следующее соотношение грибов рода Malassezia: липидонезависимый M. pachydermatis у собак был выделен в 97% случаев, у кошек - в 73%; липидозависимые виды малассезий у собак выделены в 3% случаев, у кошек – в 27%.

3. Основные клинические формы малассезиоза у собак и кошек – отиты (75% и 76% соответственно) и дерматиты (18% и 12% соответственно), второстепенные - конъюнктивиты, риниты, стоматиты, вагиниты, акропоститы, поститы, баланопоститы, протекающие ассоциативно с бактериозами.

4. Обнаружен и описан новый симптом болезни у собак – поражение волоса, сопровождающееся изменением его окраски на бурую с приобретением нетипичной жесткости.

5. Установлены оптимальные условия культивирования грибов рода Malassezia: липидонезависимый M. pachydermatis хорошо растет на агаре Сабуро при температуре 370С, а липидозависимые (M. restricta, M. globosa, M. sympodialis) на среде Leeming-Notman при температуре 320С.

6. Разработан метод экспресс диагностики малассезиозов животных для использования в широкой ветеринарной практике.

.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Лабораторной ветеринарной практике предложены «Методические наставления по лабораторной диагностике малассезиозов животных», утвержденные Отделением ветеринарной медицины и Российской академией сельскохозяйственных наук 12 октября 2010г.


СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ


  1. Ивченко О.В. Микобиота кожи и некоторых других органов у городских мелких домашних животных /О.В. Ивченко //Проблемы медицинской микологии: Сб. науч. тр. - Спб МАПО. - 2007. -Т.9 (2).- С. 59-60.

  2. Ивченко О.В. Роль микофлоры в развитии наружного отита /О.В. Ивченко //Современная микология в России: Сб. науч. тр.-М.: Национальная академия микологии.-2008. -Т.2. -С. 492.

  3. Литвинов А.М. Дерматофитозы плотоядных и грызунов клеточного содержания /А.М. Литвинов, В.Ю. Соловьева, О.В. Ивченко, Н.А. Апанасенко, А.И. Касьянов, О.В. Чебаков //Кролиководство и звероводство.- Москва.- 2008.- №4.-С. 29-31.- №5.- С. 26-27.

  4. Ивченко О.В. Некоторые статистические данные при малассезиозе собак /О.В. Ивченко //Иммунопатология, аллергология, инфектология. – Москва.- 2010. -№1.- С. 156.

  5. Литвинов А.М. Малассезиозы животных /А.М. Литвинов, О.В. Ивченко, А.И. Касьянов //Ветеринария.- 2010.-№6.-С. 13-15.


Добавить документ в свой блог или на сайт
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:

Похожие:

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconСпецифические терапия и профилактика кожного кандидоза плотоядных животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология icon16. 00. 03 -ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconВлияние гликопина на иммуногенез у животных при комплексном применении с вакцинами 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconПрограмма дисциплины од. А 03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconФункциональная и рецепторная характеристика белков суперсемейства иммуноглобулинов в процессе онто- и иммуногенеза у животных 16. 00. 03. Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconОсобенности краевой эпизоотологии доминирующих Бактериальных инфекций Сельскохозяйственных животных в республике бурятия 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconЭпизоотология и профилактика дизентерии свиней в южном и северо-кавказском федеральных округах 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconПрограмма вступительного экзамена по специальности (06. 02. 02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология)

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconФармакологическое обоснование применения тетраголда при колибактериозе поросят 06. 02. 03 ветеринарная фармакология и токсикология 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диагностика малассезиозов животных 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология iconМикробиологическая оценка безопасности пищевых продуктов. 16. 00. 03 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Поместите кнопку у себя на сайте:
Образование


База данных защищена авторским правом ©cow-leech 2000-2013
обратиться к администрации | правообладателям | пользователям
COW-LEECH.RU